胰蛋白酶（Trypsin）簡稱胰酶,，是一種絲氨酸水解酶，能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷,。在組織細(xì)胞的提取,、培養(yǎng)，以及體外細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，均會使用到胰蛋白酶消化液,，用于水解細(xì)胞間蛋白質(zhì)，使組織或細(xì)胞離散成單個細(xì)胞,。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強(qiáng),。常用胰酶工作濃度為0.25%,。EDTA可以螯合鈣鎂離子,，胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細(xì)胞間連接蛋白的水解，起到增強(qiáng)消化的效果,。酚紅是一種pH指示劑,，溶液偏堿性時呈紫紅色,，偏酸性時呈橘紅色，近中性時呈粉紅色,。本產(chǎn)品為0.25%胰蛋白酶消化液,，含0.25%胰蛋白酶，溶于Hank’s緩沖液,，不含EDTA,，無酚紅指示劑，經(jīng)0.22μm過濾除菌,。胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,，歸因于使用干冰運(yùn)輸。寧夏重組胰酶一般多少錢

常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶,。一般濃度在0.25-0.5%,。作用時間根據(jù)干細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大,，從幾分鐘到幾十分鐘不等,。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細(xì)胞，在37度條件下,，一般消化1-5分鐘就足夠了,。終止是用血清。主要作用于干細(xì)胞間,。配制時不能用含鈣,、鎂的平衡液，否則影響活性,。保存于-20度,。膠原酶：膠原酶是比較少用的，一般是用原代培養(yǎng)時,，從組織消化下干細(xì)胞,。這種方法作用溫和，對干細(xì)胞損傷較小,，但是,，價格也較貴。中止同樣是用血清,。胰酶的質(zhì)量是影響干細(xì)胞的消化的關(guān)鍵因素之一,，如果配的比較標(biāo)準(zhǔn)，消化的時候就容易消化,，反之就不易消化,。還要在你看到消化過頭的情況下，如果干細(xì)胞下來的比較多了，這時可以連同cmf或pbs加上營養(yǎng)液一起傳,。營養(yǎng)液中有血清,，胰酶遇到血清就會自動終止消化，但這樣操作對干細(xì)胞是有一定的影響的,。對于容易消化的干細(xì)胞,，加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s）,，棄之,，再加入適量胰酶作用10s-40s（根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度），棄之,，這樣依賴殘余的胰酶就可將干細(xì)胞消化單細(xì)胞,。寧夏重組胰酶一般多少錢EDTA是乙二胺四乙酸，一種金屬螯合劑,。

    冰凍保存,，但不得反復(fù)凍融。供試品溶液的制備取本品適量,，精密稱定,，加。測定法取底物溶液,、（pH）1ml,，混勻，作為空白,。取供試品溶液（預(yù)熱至25℃±℃）,，立即計時并搖勻，使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±℃,，照紫外－可見分光光度法（2010年版*典二部附錄ⅣA）,，在237nm的波長處，每隔30秒讀取吸光度,，共5分鐘,，每30秒鐘吸光度的變化率應(yīng)恒定，且恒定時間不得少于3分鐘,。以吸光度為縱坐標(biāo),，時間為橫坐標(biāo)，作圖,，取在3分鐘內(nèi)成直線部分的吸光度,，按下式計算。式中P為每2500胰蛋白酶單位中含糜蛋白酶的量,，單位,；A2為直線上開始的吸光度,；A1為直線上終止的吸光度；T為A2至A1讀數(shù)的時間,，分；W為測定液中含供試品的量,，mg;,，吸光度每分鐘改變，即相當(dāng)于1個糜蛋白酶單位,。每2500單位胰蛋白酶中不得多于50單位的糜蛋白酶,。干燥失重取本品適量，以五氧化二磷為干燥劑,，在60℃減壓干燥4小時,，減失重量不得過（2010年版*典二部附錄ⅧL）。胰蛋白酶效價測定底物溶液的制備取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽,，加水溶解使成100ml,，作為底物原液；取10ml,，用磷酸鹽緩沖液（取,，pH值為）稀釋成100ml，照紫外－可見分光光度法（2010年版*典二部附錄ⅣA）,，恒溫于℃±℃,，以水作空白。

胰酶中的酚紅有哪些作用,？酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH指示劑,，中性時為紅色，酸性時為黃色,，堿性時為紫色,。研究表明：酚紅可以模擬固醇類***（特別是雌***）的作用。為避免固醇類反應(yīng),，培養(yǎng)細(xì)胞尤其是哺乳類細(xì)胞時,，建議用不含酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,，在做流式細(xì)胞檢測時,，也會使用不含酚紅的培養(yǎng)基或者胰酶。圖 2. Phenol red test圖片來源網(wǎng)絡(luò)8,、在做細(xì)胞凋亡檢測時,，細(xì)胞為什么不能用含有EDTA的胰酶消化？Annexin V（膜聯(lián)蛋白）是Ca2+依賴的蛋白,，EDTA會螯合Ca2+從而影響Annexin V,，進(jìn)而影響結(jié)果,，因此需選用不含EDTA的胰酶。建議放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行消化,，時間可以長一點,。隨時觀察細(xì)胞情況，避免消化過度,；也可使用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下,，后用***吹勻，比消化簡單,，還可避免使用胰酶帶來的傷害,。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差,。

    ①制備粗酶液稱取定量粗胰酶,，其胰蛋白酶活性為，胰淀粉酶活性為,，胰脂肪酶活性為,。將其用pH值為、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解,，然后進(jìn)行真空過濾,，收集濾液并用磷酸緩沖液進(jìn)行稀釋，使胰蛋白酶活性為3-10U/mg,，備用,。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重，放入干燥器中冷卻至室溫,。然后稱取,，加入10L異辛烷，在攪拌下使其形成均勻的分散液,，再加入定量蒸餾水,，在200r/min的轉(zhuǎn)速下處理2h，獲得濃度為,。使用時用異辛烷稀釋10倍,。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3-4次,，,，在300-400r/min的轉(zhuǎn)速下萃取5-10min。如此每次萃取完成后,，均進(jìn)行離心分離,，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min，時間10-15min收集,、合并離心上層清液,，進(jìn)行反萃取,，下層萃余液用于制備胰脂肪酶。④反萃取將荷載胰蛋白酶的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,，在攪拌下加入等體積的反萃取液進(jìn)行反萃取15-20min萃取液為0．,。如此反萃取3次，每次萃取完成后,，均進(jìn)行離心分離,，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min,時間為15-20min。分別收集,、合并離心上層清液和下層反萃取液，前者再生后可再次萃取胰蛋白酶,。 胰酶4℃保存,，一年有效；-20℃可保存更長時間,。甘肅重組胰酶供應(yīng)商家

胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點,。寧夏重組胰酶一般多少錢

    一、EDTA-胰蛋白酶的配制實驗簡介：EDTA-胰蛋白酶的配制實驗所需的EDTA是乙二胺四乙酸,，一種金屬螯合劑,。它通常與胰蛋白酶結(jié)合使用。原因是鈣和鎂等金屬離子會降低胰酶的活性,，因此在使用胰蛋白酶消化液時應(yīng)添加EDTA,。它可以螯合這些離子并消除胰酶的**作用。二,、EDTA-胰蛋白酶的配制實驗所需材料及試劑：PBS,氫氧化鈉,EDTA,三,、EDTA-胰蛋白酶的配制實驗步驟：1.磷酸酶的質(zhì)量/體積比為％，即將,。注意,，盡量不要用水溶解，因為必須保持滲透壓,。％％,，可根據(jù)細(xì)胞消化的難度進(jìn)行調(diào)整。不需要EDTA,，可以省略易于消化的細(xì)胞,。EDTA對細(xì)胞粘附有影響，因此應(yīng)大量使用,。如果影響粘附,，則必須將其用于消化，在用完全培養(yǎng)基終止消化后,，離心并棄去上清液,，然后添加完全培養(yǎng)基以進(jìn)行培養(yǎng)以除去EDTA,。如果不影響附著力，則不要離心,。,。用磷酸酶稀釋PBS。4.請注意,，血清可以阻止血漿酶的作用,，但不能阻止EDTA。對于某些細(xì)胞,，有必要在消化后停止離心,。5.當(dāng)pH約為8時，磷酸酶和EDTA**易溶解,。在制備過程中,，您可以先滴幾滴氫氧化鈉以將pH調(diào)整為8。請注意,，磷酸酶會使溶液變酸,，因此您應(yīng)隨時溶解時測量pH值。調(diào)整,。請注意,，不應(yīng)添加過量的氫氧化鈉，否則電池將無法承受堿的作用,。寧夏重組胰酶一般多少錢