EDTA-胰蛋白酶的配制1,、胰酶是,，就是說,，盡量不要用水來溶,，因?yàn)橐３譂B透壓,。2、EDTA的工作液溶度是－,，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整,。EDTA并不是必須的，容易消化的細(xì)胞可不加,。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響,，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁,，但消化時(shí)必須要用,，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清,，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),，可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒影響,，那么可不離心,。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比,。和胰酶一起溶于PBS,。4、注意,，血清可終止胰酶的作用,，但不能終止EDTA的作用，對(duì)有些細(xì)胞來說,，終止消化后的離心是必要的,。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解,，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8,，注意，胰酶可使溶液變酸,，所以要邊溶邊測pH,，隨時(shí)調(diào)整。注意,，不可加過量NaOH,，否則過堿，細(xì)胞會(huì)受不了,。6,、胰酶EDTA相對(duì)比較難溶,，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜,，待溶解后過濾除菌,。7、可配2－3乘的胰酶,，這樣比較節(jié)約時(shí)間和濾器,，用的時(shí)候?qū)ι蠝缇鶳BS即可。8,、儲(chǔ)存液放在－20度冰箱凍存,，使用液放在4度，用的時(shí)候不要放在27度水浴鍋溫浴,，因?yàn)檫@樣會(huì)讓胰酶很快失效,，使用前放在室溫下一會(huì)，因?yàn)榧拥牧亢苌?，所以一般不?huì)凍壞細(xì)胞,。9、消化時(shí),。 胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,，歸因于使用干冰運(yùn)輸。陜西胰酶產(chǎn)品介紹

    產(chǎn)品簡介產(chǎn)品簡介：產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱產(chǎn)品包裝產(chǎn)品價(jià)格C0201胰酶細(xì)胞消化液100ml碧云天生產(chǎn)的胰酶細(xì)胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含,。該消化液經(jīng)過過濾**,，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化，或者一些**的消化,。本胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn),，通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。包裝清單：產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱包裝C0201胰酶細(xì)胞消化液100ml―說明書1份保存條件：4℃保存,，一年有效,。注意事項(xiàng)：在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被**污染。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長,，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會(huì)較差,。為了您的安全和**，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。使用說明使用說明：1.貼壁細(xì)胞的消化：a)吸去培養(yǎng)液,，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,，以去除殘余的血清,。b)加入少量胰酶細(xì)胞消化液，略蓋過細(xì)胞即可,，室溫放置30秒至2分鐘,。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同,。c)顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮,，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,；或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來。此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液,。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞,，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。d)如果發(fā)現(xiàn)消化不足。陜西胰酶產(chǎn)品介紹0.25%胰酶消化液（含有EDTA,，含酚紅）pH值為7.2-7.8,。

胰酶細(xì)胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶（Trypsin）、0.02%EDTA和酚紅,不含Ca2＋和Mg2＋,。該消化液已用0.22μm濾膜過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化,。本胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn),通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。使用說明：貼壁細(xì)胞的消化：1,、吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS,、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。2,、加入少量胰酶細(xì)胞消化液（含酚紅）,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置30秒至2分鐘,。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。3,、顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,；此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液；加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。4,、如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。5,、如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來,。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶,，屬于絲氨酸蛋白酶家族,，不僅可以水解堿性氨基酸（精氨酸或賴氨酸）羧基端的肽鍵，還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵,。胰蛋白酶可以從牛,、豬等哺乳動(dòng)物的胰臟提取，經(jīng)過純化后獲得結(jié)晶,，再制成凍干制劑,。牛的胰蛋白酶有223個(gè)氨基酸,，分子量為23800道爾頓，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶,。胰蛋白酶溶于水,，不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有機(jī)溶劑,。胰蛋白酶的等電點(diǎn)pH值為10.1,，**適pH值范圍在7.8~8.5左右，pH值大于9.0時(shí)不可逆失活,。鈣離子對(duì)胰蛋白酶的酶活具有保護(hù)和***作用,。[1]胰酶細(xì)胞消化液含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA。

1,、細(xì)胞培養(yǎng)過程中為什么要使用胰酶呢,？胰酶的作用是什么？胰酶是一種蛋白酶,，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈,，通過在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解,，從而使兩者分離,。這時(shí)，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形,。圖1.胰酶酶切位點(diǎn)2,、使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，在使用胰酶消化時(shí)發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過程,，這是什么原因,？血清終止的原理其實(shí)是競爭抑制，就是用過量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合,，使胰酶失去消化細(xì)胞蛋白的機(jī)會(huì),。3、為什么使用了胰蛋白酶消化,，細(xì)胞還是成團(tuán)的,，這可能是什么原因?qū)е碌模竣傧瘯r(shí)間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細(xì)胞密度過高之后才消化傳代⑤胰酶存儲(chǔ)不當(dāng),，或者使用了過期胰酶消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的,？浙江胰酶價(jià)格對(duì)比

為什么收到的胰酶會(huì)有顏色差異？陜西胰酶產(chǎn)品介紹

品名：0.25%胰蛋白酶溶液,，1X分類：細(xì)胞消化試劑規(guī)格：100ML用途：消化試劑,，如胰蛋白酶，被用于將粘附細(xì)胞從其附著的表面或底物上分離和降解，以及將組織進(jìn)行游離,，以開展原代細(xì)胞培養(yǎng),。產(chǎn)品包括2種常用濃度的γ照射豬胰蛋白酶（1：250）以及一種新型非哺乳動(dòng)物豬胰蛋白酶替代品，稱為ThermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一種蛋白水解酶和膠原水解酶的混合超濾溶液,，可以快速消化,，同時(shí)不損傷細(xì)胞。其非哺乳動(dòng)物配方使它適用于無血清應(yīng)用,，不需要失效或?qū)γ敢种苿?。此試劑可使?xì)胞被快速分離，形成單細(xì)胞懸浮物,，保持高細(xì)胞活力,，并使傳代時(shí)的變異減至**小。陜西胰酶產(chǎn)品介紹