①制備粗酶液稱(chēng)取定量粗胰酶,，其胰蛋白酶活性為,，胰淀粉酶活性為,，胰脂肪酶活性為,。將其用pH值為,、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解，然后進(jìn)行真空過(guò)濾,，收集濾液并用磷酸緩沖液進(jìn)行稀釋?zhuān)挂鹊鞍酌富钚詾?-10U/mg,，備用。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重,，放入干燥器中冷卻至室溫,。然后稱(chēng)取，加入10L異辛烷,，在攪拌下使其形成均勻的分散液,，再加入定量蒸餾水，在200r/min的轉(zhuǎn)速下處理2h,，獲得濃度為,。使用時(shí)用異辛烷稀釋10倍。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3-4次,，，在300-400r/min的轉(zhuǎn)速下萃取5-10min,。如此每次萃取完成后,，均進(jìn)行離心分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min,，時(shí)間10-15min收集,、合并離心上層清液，進(jìn)行反萃取,，下層萃余液用于制備胰脂肪酶,。④反萃取將荷載胰蛋白酶的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中，在攪拌下加入等體積的反萃取液進(jìn)行反萃取15-20min萃取液為0．,。如此反萃取3次,，每次萃取完成后，均進(jìn)行離心分離,，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min,時(shí)間為15-20min,。分別收集,、合并離心上層清液和下層反萃取液，前者再生后可再次萃取胰蛋白酶,。 在消化酶中,，胰酶主要用于促進(jìn)消化。廣西EDTA胰酶

胰酶細(xì)胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶（Trypsin）,、0.02%EDTA和酚紅,不含Ca2＋和Mg2＋,。該消化液已用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。本胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn),通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞,。使用說(shuō)明：貼壁細(xì)胞的消化：1,、吸去培養(yǎng)液,用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清,。2,、加入少量胰酶細(xì)胞消化液（含酚紅）,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同,。3,、顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)；此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液,；加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。4、如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化,。5,、如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。河南重組胰酶進(jìn)口胰酶在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用和在消化酶中的作用,？

胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度,、溫度和作用時(shí)間有關(guān),，在pH為8.0、溫度為37°℃時(shí),，胰酶溶液的作用能力**強(qiáng),。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度,、溫度和時(shí)間,，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+,、Mg2+和血清,、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+,、Mg2+的BSS,，如:D-Hanks液。終止消化時(shí),，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用,。

細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶的濃度越高是越好 貼壁細(xì)胞的消化：  常用的消化方法主要有酶消化法、離子螯合劑,、物理法和冷凍法,。其中**常用的是酶消化法。酶消化法：貼壁干細(xì)胞酶消化傳代時(shí)通常采用兩種方式：1,、加入胰酶等干細(xì)胞脫落后,，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用，離心傳代,；2,、加入胰酶后，鏡下觀察待干細(xì)胞開(kāi)始脫落時(shí),，棄去胰酶,，加入培養(yǎng)液并分瓶。但前者太麻煩,，而后者有可能對(duì)干細(xì)胞施加胰酶選擇,，因?yàn)榭偸琴N壁不牢的干細(xì)胞先脫落。消化同種細(xì)胞時(shí)含EDTA的胰酶消化時(shí)間會(huì)比不含EDTA時(shí)間短,。

細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度?常見(jiàn)濃度為0.25%的胰酶(含有螯合劑),，半貼壁細(xì)胞或者對(duì)胰酶敏感的細(xì)胞，可采用0.05%濃度的胰酶(含有或者不含有螯合劑)進(jìn)行細(xì)胞消化,。由于細(xì)胞膜上的粘附蛋白需要金屬離子維持其活性,，常見(jiàn)的胰酶中含有EDTA等整合劑,如果細(xì)胞貼壁不是非常緊密，也可用不含有螯合劑的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化,。胰酶對(duì)細(xì)胞膜上粘附蛋白的損害比較大,，如果進(jìn)行細(xì)胞膜上蛋白的研究，建議選擇溫和的細(xì)胞消化試劑,，盡量減少對(duì)細(xì)胞膜上蛋白的損傷,。此外，由于胰酶自身也是一種蛋白,，胰酶也會(huì)自己剪切自己,建議胰酶不要反復(fù)凍融,，拿到手中的大瓶胰酶進(jìn)行分裝使用。除了常見(jiàn)的胰酶(含有或者不含有EDTA),。胰蛋白酶屬于其中一種活性成分,，主要用于促進(jìn)消化吸收。廣西EDTA胰酶

消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的,？廣西EDTA胰酶

    (不含EDTA含酚紅)性質(zhì),、用途與生產(chǎn)工藝背景胰酶又名胰醇素,、胰液素。白色或淡黃色無(wú)定形粉末,。系從各種動(dòng)物胰臟制取的混合物,，主要是蛋白酶、脂酶,、淀粉酶,。溶于水呈微渾溶液。不溶于醇,、醚,。有引濕性，遇酸,、堿及熱即喪失活力,，水溶液遇酸、熱,、重金屬或單寧酸時(shí)產(chǎn)生沉淀,。為助消化藥，用于缺乏胰液的***癥,。也用于皮革工業(yè)和紡織印染,，主要用于酶法脫毛。將絞碎的豬胰漿經(jīng)***,、提取,、沉淀、脫脂,、干燥,、粉碎而得。簡(jiǎn)介(不含EDTA含酚紅)為細(xì)胞培養(yǎng)基,，1.不含EDTA含酚紅：含酚紅,，（1：250）溶于HBSS溶液，不含鈣鎂,。-20℃保存,。胰(不含EDTA含酚紅)含，不含EDTA和酚紅,，溶于無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液中,，經(jīng)過(guò)濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織的消化,，通常室溫消化2分鐘左右就消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞,。使用方法(不含EDTA含酚紅)使用說(shuō)明---貼壁細(xì)胞Chemicalbook的消化：a)吸去培養(yǎng)液，用無(wú)菌的PBS,、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,，以去除殘余的血清,。b)加入少量胰蛋白酶消化液，蓋過(guò)細(xì)胞即可,，室溫放置1-2分鐘,。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同，對(duì)于貼壁牢固的細(xì)胞可適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間,。c)顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮,，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,。 廣西EDTA胰酶