胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶，屬于絲氨酸蛋白酶家族，不僅可以水解堿性氨基酸（精氨酸或賴氨酸）羧基端的肽鍵，還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵,。胰蛋白酶可以從牛、豬等哺乳動(dòng)物的胰臟提取,，經(jīng)過純化后獲得結(jié)晶,，再制成凍干制劑。牛的胰蛋白酶有223個(gè)氨基酸,，分子量為23800道爾頓,，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。胰蛋白酶溶于水,，不溶于乙醇,、甘油和三氯甲烷等有機(jī)溶劑。胰蛋白酶的等電點(diǎn)pH值為10.1,，**適pH值范圍在7.8~8.5左右,，pH值大于9.0時(shí)不可逆失活。鈣離子對胰蛋白酶的酶活具有保護(hù)和***作用,。[1]0.25%胰酶細(xì)胞消化液(含有EDTA,，含酚紅)消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長。湖北EDTA胰酶市場報(bào)價(jià)

1,、胰酶是,，就是說PBS,注意，盡量不要用水來溶,，因?yàn)橐３譂B透壓,。2、EDTA的工作液溶度是－,，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整,。EDTA并不是必須的，容易消化的細(xì)胞可不加,。EDTA對細(xì)胞貼壁性有影響,，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁,，但消化時(shí)必須要用,，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清,，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),，可去除EDTA。如果對貼壁沒影響,，那么可不離心,。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS,。4,、注意，血清可終止胰酶的作用,，但不能終止EDTA的作用,，對有些細(xì)胞來說，終止消化后的離心是必要的,。5,、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8,，注意,，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測pH,，隨時(shí)調(diào)整,。注意，不可加過量NaOH,，否則過堿,，細(xì)胞會(huì)受不了。6,、胰酶EDTA相對比較難溶,，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜,，待溶解后過濾**,。7、可配2－3乘的胰酶,，這樣比較節(jié)約時(shí)間和濾器,，用的時(shí)候?qū)ι?*PBS即可。8,、儲(chǔ)存液放在－20度冰箱凍存,，使用液放在4度，用的時(shí)候不要放在27度水浴鍋溫浴,，因?yàn)檫@樣會(huì)讓胰酶很快失效,，使用前放在室溫下一會(huì)。甘肅重組胰酶哪家便宜胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液,。

胰酶中的酚紅有哪些作用,？酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH指示劑，中性時(shí)為紅色,，酸性時(shí)為黃色,，堿性時(shí)為紫色,。研究表明：酚紅可以模擬固醇類***（特別是雌***）的作用。為避免固醇類反應(yīng),，培養(yǎng)細(xì)胞尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí),，建議用不含酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,，在做流式細(xì)胞檢測時(shí),，也會(huì)使用不含酚紅的培養(yǎng)基或者胰酶,。圖 2. Phenol red test圖片來源網(wǎng)絡(luò)8,、在做細(xì)胞凋亡檢測時(shí)，細(xì)胞為什么不能用含有EDTA的胰酶消化,？Annexin V（膜聯(lián)蛋白）是Ca2+依賴的蛋白,，EDTA會(huì)螯合Ca2+從而影響Annexin V，進(jìn)而影響結(jié)果,，因此需選用不含EDTA的胰酶,。建議放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行消化，時(shí)間可以長一點(diǎn),。隨時(shí)觀察細(xì)胞情況,，避免消化過度；也可使用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下,，后用***吹勻,，比消化簡單，還可避免使用胰酶帶來的傷害,。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):1.研究的對象是活細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時(shí)間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu),、生命活動(dòng)等,。2.研究條件可以人為控制pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué),、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。EDTA是乙二胺四乙酸,，一種金屬螯合劑,。

    ①制備粗酶液稱取定量粗胰酶，其胰蛋白酶活性為,，胰淀粉酶活性為,，胰脂肪酶活性為。將其用pH值為,、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解,，然后進(jìn)行真空過濾，收集濾液并用磷酸緩沖液進(jìn)行稀釋,，使胰蛋白酶活性為3-10U/mg,，備用。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重,，放入干燥器中冷卻至室溫,。然后稱取，加入10L異辛烷,，在攪拌下使其形成均勻的分散液,，再加入定量蒸餾水，在200r/min的轉(zhuǎn)速下處理2h,，獲得濃度為,。使用時(shí)用異辛烷稀釋10倍。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3-4次,，，在300-400r/min的轉(zhuǎn)速下萃取5-10min,。如此每次萃取完成后,，均進(jìn)行離心分離,，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min，時(shí)間10-15min收集,、合并離心上層清液,，進(jìn)行反萃取，下層萃余液用于制備胰脂肪酶,。④反萃取將荷載胰蛋白酶的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,，在攪拌下加入等體積的反萃取液進(jìn)行反萃取15-20min萃取液為0．。如此反萃取3次,，每次萃取完成后,，均進(jìn)行離心分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min,時(shí)間為15-20min,。分別收集,、合并離心上層清液和下層反萃取液,，前者再生后可再次萃取胰蛋白酶,。 胰酶可在-20℃下保存一年。湖北EDTA胰酶市場報(bào)價(jià)

含EDTA的胰酶消化活力會(huì)比不含EDTA的強(qiáng),。湖北EDTA胰酶市場報(bào)價(jià)

細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度?常見濃度為0.25%的胰酶(含有螯合劑),，半貼壁細(xì)胞或者對胰酶敏感的細(xì)胞，可采用0.05%濃度的胰酶(含有或者不含有螯合劑)進(jìn)行細(xì)胞消化,。由于細(xì)胞膜上的粘附蛋白需要金屬離子維持其活性,，常見的胰酶中含有EDTA等整合劑,如果細(xì)胞貼壁不是非常緊密，也可用不含有螯合劑的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化,。胰酶對細(xì)胞膜上粘附蛋白的損害比較大,，如果進(jìn)行細(xì)胞膜上蛋白的研究，建議選擇溫和的細(xì)胞消化試劑,，盡量減少對細(xì)胞膜上蛋白的損傷,。此外，由于胰酶自身也是一種蛋白,，胰酶也會(huì)自己剪切自己,建議胰酶不要反復(fù)凍融,，拿到手中的大瓶胰酶進(jìn)行分裝使用。除了常見的胰酶(含有或者不含有EDTA),。湖北EDTA胰酶市場報(bào)價(jià)