一）、實驗室種子培養(yǎng)基**方法1,、高壓蒸汽**鍋、手提式**鍋,。容量小。2、立式或臥式**鍋,。容量較大,，一般能裝幾十瓶或幾百瓶。3,、**柜,。要和蒸汽鍋爐配套，用于大量種瓶培養(yǎng)基的**,，一次能裝幾百至幾千瓶(袋),。（二）、培養(yǎng)基的分批**1,、定義：將配制好的培養(yǎng)基輸入發(fā)酵罐中,，用蒸汽加熱，使培養(yǎng)基和設(shè)備同時**的一種**方式,，又稱實罐**,。2、**過程過程包括升溫,、保溫和冷卻等三個階段,，各階段對**的貢獻：20%、75%,、5%,。培養(yǎng)基的升溫可由兩種方式實現(xiàn)：間接加熱，在夾套或蛇管中通入蒸汽加熱,；直接加熱,，在培養(yǎng)基中直接通入熱蒸汽加熱。**過程中加熱和保溫階段的**作用是主要的,，而冷卻階段的**作用是次要的,，一般很小，可以忽略不計,。此外,，還應(yīng)指出的是，應(yīng)當避免長時間的加熱階段,，因為加熱時間過長,，不僅破壞營養(yǎng)物質(zhì)，而且也有可能引起培養(yǎng)液中某些有害物質(zhì)的生成,，從而影響培養(yǎng)過程的順利進行。在實際生產(chǎn)中,，也可能遇到所供蒸汽不足,、溫度不夠高的情況，這時可以適當延長**時間。生產(chǎn)上甚至有用100℃蒸煮而達到徹底**的實例,。如要做固體曲而沒有高溫蒸汽時,，可將原料用100蒸汽蒸30min，殺死其中的營養(yǎng)細胞,，但孢子與**的芽孢沒有被殺死,。無血清培養(yǎng)基適用于需要無血清環(huán)境的細胞。吉林DMEM高糖培養(yǎng)基常用知識

    平衡鹽溶液（balancedsaltsolution,，BSS）簡稱鹽溶液,，集緩沖液的緩沖能力、生理鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營養(yǎng)供應(yīng)特點于一體,，兼具維持滲透壓,、緩沖和調(diào)節(jié)溶液的酸堿度、同時供給細胞生存所必需的能量和無機離子成分的作用,。各種BSS的緩沖系統(tǒng)有所不同,，其中以Hank’s液和Earle’s液為例，它們主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高,。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,，以維持溶液的pH值。Eagles液在空氣水平的CO2中,，溶液會變堿,，Hank’s液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存**,，需要用Earle’s液,，。如果**是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的**,，用Hank’s液就可以了,。表3-1幾種常用的平衡鹽溶液配方（g/L）一些BSS含有的Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成分,，同時參與許多重要的細胞功能活動,。但它們有使細胞凝集的作用，在配制分散細胞的消化液和特殊用途的細胞洗滌時,，宜采用Ca2+,、Mg2+含量較低的Dulbecco液或無Ca2+、Mg2+的D-Hanks液,，或者PBS液,。概述基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基主要包括199、MEM,、RPMI-1640,、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸,、維生素,、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì),。寧夏減血清培養(yǎng)基常用知識MEM培養(yǎng)基含有必要的氨基酸和維生素,。

    以及無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。RPMI-1640細胞培養(yǎng)基專門針對淋巴細胞培養(yǎng)設(shè)計,，含有BSS,、21種氨基酸、維生素等,，***適于多種正常細胞和腫*細胞的培養(yǎng),，也用做懸浮細胞培養(yǎng)。HamF12細胞培養(yǎng)基含微量元素,，可在血清含量低時用,，適用于克隆化培養(yǎng)。F12適用于CHO細胞,，也是無血清細胞培養(yǎng)基中常用的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基,。DMEM/F12細胞培養(yǎng)基將DMEM和F12按照1:1比例混合，混合后營養(yǎng)成份豐富,，血清使用量也減少,。常作為開發(fā)無血清細胞培養(yǎng)基時的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。與天然培養(yǎng)基相比,，有些天然的未知成分尚無法用已知的化學成分所替代,，因此，細胞培養(yǎng)中使用合成培養(yǎng)基時必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分,，以克服合成培養(yǎng)基的不足,。**普遍的做法是添加5~10%的血清，這樣才能維持細胞活力,，促進細胞增殖,。針對不同的動物細胞，現(xiàn)已開發(fā)了多種商業(yè)化,、個性化的低血清細胞培養(yǎng)基配方,，營養(yǎng)成份更加豐富，血清使用量可降低至1～3%,，由此可減少了血清等動物來源成份對生物制品安全性的影響,。（serumfreemedium，SFM）經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基,、合成培養(yǎng)基后,，無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當今細胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢,。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本,，簡化分離純化步驟,，避免**污染造成的危害。

    生產(chǎn)上一般采用冷水噴淋冷卻,，冷卻到40-50℃后,，輸送到預先已經(jīng)**過的罐內(nèi)。（四）,、間歇**與連續(xù)**的比較1,、歇**的***和缺點***是設(shè)備要求低，不需另外設(shè)置加熱,、冷卻裝置,；操作要求低，適于手動操作,，適合于小批量生產(chǎn)規(guī)模,；適合于含有大量固體物質(zhì)的培養(yǎng)基的**。缺點是培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)損失較多,，**后培養(yǎng)基的質(zhì)量下降,；需進行反復的加熱和冷卻，能耗較高,；不適合于大規(guī)模生產(chǎn)過程的**,；發(fā)酵罐的利用率較低。2,、連續(xù)**的***和缺點***是**溫度高,，可減少培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的損失；操作條件恒定,，**質(zhì)量穩(wěn)定,；易于實現(xiàn)管道化和自控操作；避免了復的加熱和冷卻,，提高了熱的利用率,；發(fā)酵設(shè)備利用率高。缺點是對設(shè)備的要求高,，需另外設(shè)置加熱,、冷卻裝置；操作較麻煩,；染菌的機會較多,；不適合于含大量固體物料的**；對蒸汽的要求高,。由此可見,，無論在理論上或者在實踐上,，與間歇**過程相比，連續(xù)**的***十分明顯,。因此,，連續(xù)**越來越多地被用培養(yǎng)基的**。F12培養(yǎng)基提供了豐富的營養(yǎng),，支持細胞增殖,。

    微量元素在細胞內(nèi)通常以與有機物結(jié)合的形式存在。其中鐵在細胞中參與氧的轉(zhuǎn)運,；鈷是維生素B12的組成部分,，參與葉酸的合成和脂肪酸的合成；鎳能夠***脫氧核糖核酸酶,、乙酰輔酶A合成酶等在細胞內(nèi)具有重要功能的酶,，還具有穩(wěn)定核酸結(jié)構(gòu)的功能；亞硒酸鈉中的硒,，作為谷胱甘肽過氧化物酶的輔基,，具有抗過氧化物能力，參與消除細胞內(nèi)的脂肪酸過氧化物,，提高細胞的生長速率和活性,。在低血清、無血清細胞培養(yǎng)基中,，為滿足細胞生長增殖需要,，常常添加一些成份：蛋白質(zhì)、多肽,、核苷,、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物,、脂類,、及一些血清替代因子等。其中蛋白質(zhì)具有重要的作用,，動物細胞對許多物質(zhì)（難溶于水的離子或脂類物質(zhì)）的攝取需要借助蛋白質(zhì)的傳遞作用,，如白蛋白、傳遞蛋白,、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸,、***、礦物質(zhì)等促進細胞生長,。轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白,，能夠結(jié)合鐵，促進細胞對鐵離子的吸收,，并具有***作用,，其促生長作用可能與其具有生長因子的功能有關(guān),。胰島素可促進細胞對葡萄糖和氨基酸的利用，商業(yè)化中一些生長因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中,，主要用來刺激細胞增殖,，并可促進糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一種重要的刺激細胞生長的化合物,，是腦磷酸的合成前提,。MEM培養(yǎng)基提供了細胞生長所需的基本營養(yǎng)成分。黑龍江培養(yǎng)基價格對比

MEM培養(yǎng)基在藥物篩選中有重要作用,。吉林DMEM高糖培養(yǎng)基常用知識

    mgso4·7h2o20-200mg/l，2-羥基乙胺10-50mg/l,，cecl31-20mg/l,，mnso4·h2o1-10mg/l，feso4·7h2o1-10mg/l,，vb15-50mg/l,，生物素1-10μg/l；將各原料攪拌均勻后,，調(diào)節(jié)ph為6-7,，121℃**，自然冷卻,，制得發(fā)酵培養(yǎng)基a,。更推薦地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為：取各原料：葡萄糖80g/l,，酵母浸膏20g/l,，k2hpo42g/l，mgso4·7h2o50mg/l,，2-羥基乙胺40mg/l,，cecl310mg/l，mnso4·h2o3mg/l,，feso4·7h2o3mg/l,，vb110mg/l，生物素7μg/l,；將各原料攪拌均勻后,，調(diào)節(jié)ph為，121℃**15min,，自然冷卻,，制得發(fā)酵培養(yǎng)基a。推薦地,，所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為：取各原料：琥珀酸1-10g/l,，尿素1-5g/l,，殼聚糖20-100mg/l；將各原料攪拌均勻后,，調(diào)節(jié)ph,，**，制得發(fā)酵培養(yǎng)基b,；更推薦地,，所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為：取各原料：琥珀酸5g/l，尿素2g/l,，殼聚糖80mg/l,；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為,，121℃**15min,，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基b,。與現(xiàn)有技術(shù)相比,，本發(fā)明取得的有益效果主要包括但是并不限于以下幾個方面：本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基采用兩部分組成，發(fā)酵培養(yǎng)基a側(cè)重于菌株增殖的提升,，發(fā)酵培養(yǎng)基b側(cè)重于谷氨酸的合成和分泌,；前期細胞增殖時。吉林DMEM高糖培養(yǎng)基常用知識