慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,，它能夠?qū)谢驅(qū)氲揭恍┹^難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,，如原代細(xì)胞等,，并且將靶基因隨機(jī)整合到宿主的基因組中，從而大da增加了轉(zhuǎn)染效率,，并且能夠在細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)若干代，可以進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的篩選,。因?yàn)槭请S機(jī)整合,，也有不確定因素，有些公司還能提供定點(diǎn)整合技術(shù),，將靶基因定點(diǎn)整合到基因組特定的部位,，從而保證其高效表達(dá)并且對(duì)細(xì)胞不產(chǎn)生隨機(jī)整合可能產(chǎn)生的傷害,。

慢病毒表達(dá)載體包含了包裝,、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息,。慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白,。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，在細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝,，包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中,，離心取得上清液后,，可以直接用于宿主細(xì)胞的感ran,。 慢病毒攜帶的基因組可整合到宿主基因組,，使宿主細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定表達(dá)外源基因。無(wú)機(jī)鹽離子檢測(cè)試劑盒

就eGFP而言,，相對(duì)于GFP,，其熒光強(qiáng)度更強(qiáng)、熒光性質(zhì)更穩(wěn)定,。mCherry是從DsRed演化來(lái)的性能*好的一個(gè)單體紅色熒光蛋白,，可以和GFP系列熒光蛋白共用，實(shí)現(xiàn)多色標(biāo)記,。熒光蛋白活性和被融合的目標(biāo)蛋白功能相互沒(méi)有明顯影響,。這些熒光標(biāo)簽蛋白,，其融合表達(dá)目的蛋白后具有以下優(yōu)點(diǎn)：1.不用破碎組織細(xì)胞和不加任何底物，直接通過(guò)熒光顯微鏡就能在活細(xì)胞中發(fā)出綠色熒光,，實(shí)時(shí)顯示目的基因的表達(dá)情況,，而且熒光性質(zhì)穩(wěn)定，被譽(yù)為活細(xì)胞探針,。2.其自發(fā)熒光,，不需用目的基因的抗體或原位雜交技術(shù)就可推知目的基因在細(xì)胞中的定位等情況。3.同時(shí)細(xì)胞內(nèi)的其它產(chǎn)物不會(huì)干擾標(biāo)簽蛋白檢測(cè),，從而使其檢測(cè)更顯得快速,、簡(jiǎn)便、靈敏度高而且重現(xiàn)性,。4.其低消耗,、高靈敏度檢測(cè)，十分適用于高通量的藥物篩選,。因此現(xiàn)eGFP表達(dá)標(biāo)簽被廣fan地應(yīng)用于基團(tuán)表達(dá)調(diào)控,、轉(zhuǎn)基因功能研究、蛋白在細(xì)胞中的功能定位,、遷移變化及藥物篩選等方面,。5.mCherry紅色熒光蛋白在標(biāo)記病毒顆粒，研究病毒和宿主細(xì)胞之間更有得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì),。如用mRFP或mCherry標(biāo)記HIV病毒顆粒,，研究HIV和宿主細(xì)胞問(wèn)的相互作用以及HIV侵染宿主細(xì)胞的過(guò)程．用mRFP標(biāo)記慢病毒顆粒，研究慢病毒在小鼠體內(nèi)的復(fù)制過(guò)程等,。慢病毒熒光亮度更高,，熒光偶聯(lián)物特異性好，熒光溢出效應(yīng)減弱,。

      細(xì)胞凋亡晚期,染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端,，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素,、過(guò)氧化物酶,、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè),，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL）,。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒(méi)有DNA的斷裂，因而沒(méi)有3'-OH形成,，很少能夠被染色。

常用的病毒載體有腺病毒,、逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒,。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體只能感ran分裂期細(xì)胞,，而且容量有限，腺病毒一般不能整合到染色體上,，只能進(jìn)行瞬時(shí)感ran,。與其它逆轉(zhuǎn)錄病毒相比，慢病毒（LV）具有可以感ran非分裂期細(xì)胞,、容納外源性基因片段大,，可以長(zhǎng)期表達(dá)等xian zhu優(yōu)點(diǎn)。慢病毒不產(chǎn)生任何有效的細(xì)胞免疫應(yīng)答,，可作為一種體外基因運(yùn)輸?shù)墓ぞ?。慢病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因表達(dá)能持續(xù)數(shù)月，且無(wú)可觀察到的病理學(xué)現(xiàn)象,。

對(duì)于一些按常規(guī)方法難以轉(zhuǎn)染甚至無(wú)法轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,，通過(guò)病毒介導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)?zāi)軌虼骴a提高基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，以達(dá)到目的基因的高效瞬時(shí)表達(dá),。 這些試劑盒旨在為各種樣品類型的AB,、tau和α-突觸核/蛋白提供準(zhǔn)確、靈敏和快速的蛋白質(zhì)定量,。

在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)操作中,，加樣是必不可少的項(xiàng)步驟，這步驟在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中都有著很大的影響,。那么酶聯(lián)免疫加樣步驟問(wèn)題應(yīng)如何解決處理呢,？

一、加樣問(wèn)題的可能原因  

1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣,；

2.手工操作中,，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))；

3.加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外,。

二,、解決方法

1.標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘,；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,，**后必須立即顛倒**管混合5-10次，放置段時(shí)間后,，3000rpm離心15分鐘,；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中,，若要貯存,，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

2.加樣后及時(shí)放入孵箱,。

3.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干,。

4.如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

5.標(biāo)本較多時(shí),，請(qǐng)分批操作,。

小建議：在整個(gè)操作過(guò)程中必須保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸，實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,，有效提高檢測(cè)質(zhì)量,。

CCK-8法的檢測(cè)靈敏度很高,，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度,。無(wú)機(jī)鹽離子檢測(cè)試劑盒

來(lái)自蛋白質(zhì)的生物熒光，如綠色熒光蛋白(GFP)可能已經(jīng)在水母等生物中存在了數(shù)百萬(wàn)年,。直到20世紀(jì)60年代,，科學(xué)家才開始真正研究綠色熒光蛋白，并推斷出它的生化特性?，F(xiàn)在,，GFP及其熒光衍生物已成為實(shí)驗(yàn)室的主要研究對(duì)象。GFP被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)科的研究,，包括：標(biāo)記基因以闡明其表達(dá)或定位,，作為生物傳感器或細(xì)胞標(biāo)記，研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,，可視化啟動(dòng)子活性等等,。

GFP是一種由238個(gè)氨基酸組成的大約27kda的蛋白，來(lái)源于水晶水母Aequorea victoria,。它的熒光發(fā)射波長(zhǎng)在可見光譜的綠色部分(因此得名),，這是由于蛋白中心的三個(gè)特定氨基酸(Ser65、Tyr66和Gly67)成熟反應(yīng)形成的發(fā)色團(tuán),。第yi次發(fā)現(xiàn)時(shí),，GFP*令人覺得不可思議的一點(diǎn)是發(fā)色團(tuán)自發(fā)形成，不需要額外的輔助因子,、底物或酶活性——它只需要在成熟過(guò)程中存在氧氣,。這意味著該蛋白可以直接從維多利亞藻中提取，并在任何生物體中表達(dá),，同時(shí)仍然保持熒光,。 無(wú)機(jī)鹽離子檢測(cè)試劑盒

上海中喬新舟生物科技有限公司

1、原代細(xì)胞：ScienCell（中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理）人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞,。

2,、培養(yǎng)基：原代細(xì)胞**低血清、無(wú)血清、無(wú)異源蛋白無(wú)動(dòng)物成分培養(yǎng)基,。

3,、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒,、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子,、ELISA試劑盒,、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等,。

4,、細(xì)胞系（株）：種類豐富（1000余種），已通過(guò)STR鑒定,；提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基,。

5、自研產(chǎn)品：支原體檢測(cè)/qing除試劑盒,、端粒酶檢測(cè)試劑盒,、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。

6,、技術(shù)服務(wù)：綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記,、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過(guò)表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,，細(xì)菌基因敲除,、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除,、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn),。