細(xì)胞增殖是通過(guò)細(xì)胞分裂引起的細(xì)胞數(shù)量增加,，在整個(gè)生命周期中對(duì)正常組織發(fā)育和維持是必須的。一些類型的細(xì)胞會(huì)處于持續(xù)增殖狀態(tài),，如皮膚和骨髓細(xì)胞,，但許多成人組織中的細(xì)胞會(huì)處于非增殖狀態(tài)，只有在損傷或感ran時(shí),，才能被激huo來(lái)補(bǔ)充細(xì)胞,。與之相反，細(xì)胞周期關(guān)鍵基因突變引起的細(xì)胞增殖失調(diào)是各類cancer的標(biāo)志,，會(huì)造成**異常的不受控制的生長(zhǎng),。增殖檢測(cè)一般用于分析分裂中的細(xì)胞數(shù)量的變化，進(jìn)而反應(yīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)及活性,，細(xì)胞增殖檢測(cè)是細(xì)胞分析和藥物研發(fā)中經(jīng)常會(huì)使用的手段,。目前廣泛應(yīng)用于**生物學(xué)，分子生物學(xué),，藥代動(dòng)力學(xué)等領(lǐng)域,。CCK-8試劑盒是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞活性和細(xì)胞毒性檢測(cè)的快速、高靈敏度試劑盒,。Qiagen試劑盒

MTT法又稱MTT比色法,，是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,，而死細(xì)胞無(wú)此功能,。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比,。與MTT相比較,，cck-8法優(yōu)勢(shì)明顯。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),，cck-8檢測(cè)OD值與活細(xì)胞數(shù)的線性關(guān)系比MTT法明顯,。而且，MTT法產(chǎn)生不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶,，需要有機(jī)溶劑DMSO溶解,，操作過(guò)程中常會(huì)出現(xiàn)溶解不完全或細(xì)胞丟失的現(xiàn)象，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。cck-8法只是加染料的一步操作,，操作簡(jiǎn)單,，檢測(cè)可實(shí)時(shí)，免去了去除培養(yǎng)基的操作,。對(duì)環(huán)境保護(hù)更為有利,，不使用有機(jī)溶劑DMSO，所需的耗材也少,。試劑盒法ELISA開(kāi)發(fā)試劑盒含有開(kāi)發(fā)免疫檢測(cè)所需的抗體對(duì)和基本組分,。與單獨(dú)購(gòu)買抗體和蛋白質(zhì)相比它們更加經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。

雙抗體夾心法是夾心法中的一種主要形式,，我們先談?wù)剨A心法吧：

夾心法（Sandwich ELISA）分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法：

雙抗體夾心法中抗原的2個(gè)不同的抗原表位被兩個(gè)抗體-捕捉抗體和檢測(cè)抗體,，分別結(jié)合。捕捉抗體固定于載體即酶標(biāo)板上,，檢測(cè)抗體通過(guò)結(jié)合抗原進(jìn)行顯色分析。

應(yīng)用于雙抗體夾心法檢測(cè)的捕捉抗體通常是單抗,，偶爾有用多抗做為捕捉抗體的情況,，但很少見(jiàn)，因?yàn)橐远嗫棺鳛椴蹲娇贵w容易出現(xiàn)交叉反應(yīng)而降低特異性,。

檢測(cè)抗體通常為多抗,，在商業(yè)化的科研試劑盒中經(jīng)常用到生物素標(biāo)記的山羊多抗，再讓生物素標(biāo)記的多抗與HRP標(biāo)記的親和素或者鏈霉親和素結(jié)合,，然后再加HRP也就是辣根過(guò)氧化物酶的底物,，通常是TMB反應(yīng)顯色，這種方法是在傳統(tǒng)的HRP酶標(biāo)記抗體的雙抗體夾心法ELISA中引入了生物素-親和素放大系統(tǒng),。

ELISA試劑盒綜上所述,，盡管目國(guó)際上以及我國(guó)有了部分標(biāo)準(zhǔn)血清或參比血清（血清盤），但是酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)目在技術(shù)上尚未做到標(biāo)準(zhǔn)化,。受方法學(xué)及技術(shù)條件的限制,，在酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定中有時(shí)不可避免的會(huì)出現(xiàn)定的非特異性，ELISA試劑盒我們可以通過(guò)以上措施把非特異性顯色降至低限底,，從而提高檢測(cè)的特異性,，并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）自問(wèn)世以來(lái),，以其敏感性高，特異性強(qiáng),，操作簡(jiǎn)便,、安全，開(kāi)創(chuàng)了免疫學(xué)診斷的新紀(jì)元在臨床診斷方面得到了廣fan的應(yīng)用。但是ELISA試劑盒在它的研究,、生產(chǎn)及使用中常常會(huì)碰到非特異性顯色問(wèn)題,，ELISA試劑盒特異性、檢驗(yàn)標(biāo)本中含酶標(biāo)記物的干擾物,，操作不當(dāng)?shù)纫蛩囟紩?huì)導(dǎo)致這樣的結(jié)果,。本文就在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的些原因及如何采取些措施，消除非特異性顯色作以分析,。GFP可作為蛋白質(zhì)純化的通用標(biāo)簽,，有許多商用的GFP抗體。

其局限性：① ELISA數(shù)據(jù)不能提供單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生因子的能力和頻率,；②因受刺激細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生是短暫的,，并且不同細(xì)胞因子基因的表達(dá)動(dòng)力學(xué)可以變化，故可能需要在幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集測(cè)試樣品以更好地表征實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或培養(yǎng)細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生,。③在任何一個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)量的細(xì)胞因子蛋白濃度可能反映細(xì)胞因子分泌,，細(xì)胞因子攝取的并發(fā)過(guò)程。通過(guò)細(xì)胞和細(xì)胞因子蛋白降解,。由于這些過(guò)程,，測(cè)量的細(xì)胞因子蛋白水平可能xian zhu低估細(xì)胞的實(shí)際細(xì)胞因子產(chǎn)生潛力。④試劑不統(tǒng)一,，標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一,，故定量不準(zhǔn)確等。本試劑盒可以檢測(cè)穩(wěn)定的,，細(xì)胞內(nèi)的乳酸脫氫酶,，當(dāng)細(xì)胞受損時(shí)，這種酶會(huì)被釋放出來(lái),。血糖試劑盒

這是一種基于熒光信號(hào)將混合細(xì)胞分離成不同群體的流式細(xì)胞術(shù),。Qiagen試劑盒

細(xì)胞毒性是由合成化合物、細(xì)胞自然產(chǎn)生毒性或免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞(如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞,自然殺傷細(xì)胞等)引起的細(xì)胞殺傷事件,。目前主要通過(guò)對(duì)受損細(xì)胞釋放的相關(guān)底物(如乳酸脫氫酶-LDH)進(jìn)行定量,從而判斷細(xì)胞膜的受損情況,。本期，將為大家講解有關(guān)細(xì)胞毒性的檢測(cè)產(chǎn)品,、原理及特點(diǎn)等內(nèi)容,。

細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)是生物相容性測(cè)試的一種，檢測(cè)藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況,，即通過(guò)檢測(cè)材料或者藥物對(duì)細(xì)胞的增殖或者生長(zhǎng)的影響,，來(lái)評(píng)價(jià)藥物或材料的毒性或者活性，主要用于藥物活性篩選,、細(xì)胞增殖測(cè)定,、細(xì)胞毒性測(cè)定、抗**藥效測(cè)定等；常用MTT法或者CCK-8法檢測(cè),，另外也可以通過(guò)Live/dead雙染法進(jìn)行細(xì)胞成像,，更直觀的記錄細(xì)胞的存活情況。 Qiagen試劑盒

上海中喬新舟生物科技有限公司

1,、原代細(xì)胞：ScienCell（中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理）人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞,。

2、培養(yǎng)基：原代細(xì)胞**低血清,、無(wú)血清,、無(wú)異源蛋白無(wú)動(dòng)物成分培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清,、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒,、細(xì)胞生長(zhǎng)因子,、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒,、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等,。

4、細(xì)胞系（株）：種類豐富（1000余種）,，已通過(guò)STR鑒定；提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基,。

5,、自研產(chǎn)品：支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒,、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品,。

6、技術(shù)服務(wù)：綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記,、熒光素酶標(biāo)記,、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過(guò)表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建，細(xì)菌基因敲除,、細(xì)胞基因敲除,、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn),。