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磷酸化蛋白的WB第三方檢測(cè)在實(shí)操過(guò)程中有哪些注意事項(xiàng)？“研究完某一蛋白的磷酸化情況后比較好也要研究一下該蛋白總的表達(dá)量 ”,。這有兩種方法,，一是：相同的 sample 在不同的 well 中上樣兩次，可在相同的gel上,，也可在不同的gel,。其一壓磷酸化蛋白，另一壓該蛋白總的表達(dá)量（包括磷酸化和未磷酸化的該蛋白）,，甚至還可跑另一個(gè) gel ,，壓內(nèi)標(biāo)。但是本人不建議如此做,，因?yàn)檫@樣比較時(shí)誤差還是較大的,。因此，比較公認(rèn)的,，本人也建議如此的方法,，即：將原先結(jié)合上的磷酸化抗體及二抗用 strip solution 洗去。

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WB（Westernblot）,，即蛋白印跡或免疫印跡（immunoblotting），是一項(xiàng)在分子生物學(xué),、生物化學(xué),、免疫學(xué)等領(lǐng)域中應(yīng)用非常廣的技術(shù)。這一技術(shù)利用抗體與組織或細(xì)胞樣品中特定蛋白的特異性結(jié)合作用,，根據(jù)顯色條帶的位置和強(qiáng)弱實(shí)現(xiàn)蛋白鑒定和表達(dá)分析,。WB技術(shù)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性。選用合適的內(nèi)參抗體能夠校正蛋白定量和上樣過(guò)程中的誤差,，通過(guò)灰度計(jì)量可以定性或定量分析不同樣品中蛋白表達(dá)情況,。做第三方檢測(cè)時(shí)為什么有時(shí)候條帶會(huì)出現(xiàn)拖帶或者彎曲？在使用特定裂解緩沖液時(shí)，或者一些植物或脂肪含量高的樣品中成分較復(fù)雜,，會(huì)對(duì)電泳條帶產(chǎn)生干擾,；樣品變性不徹底、有降解發(fā)生,、修飾,、上樣過(guò)大等情況會(huì)導(dǎo)致拖帶，凝膠不均勻,、電泳裝置滲漏,、電壓/電流過(guò)大、膠孔不平等原因會(huì)導(dǎo)致條帶彎曲,，當(dāng)很小分子量的蛋白電泳到接近凝膠下沿時(shí)也會(huì)出現(xiàn)條帶扭曲,。貴州ELISA法第三方檢測(cè)方法

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