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WB（Westernblot）,，即蛋白印跡或免疫印跡（immunoblotting），是一項在分子生物學(xué),、生物化學(xué),、免疫學(xué)等領(lǐng)域中應(yīng)用非常廣的技術(shù)。這一技術(shù)利用抗體與組織或細胞樣品中特定蛋白的特異性結(jié)合作用,，根據(jù)顯色條帶的位置和強弱實現(xiàn)蛋白鑒定和表達分析。WB技術(shù)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,。選用合適的內(nèi)參抗體能夠校正蛋白定量和上樣過程中的誤差,，通過灰度計量可以定性或定量分析不同樣品中蛋白表達情況。做第三方檢測時為什么有時候條帶會出現(xiàn)拖帶或者彎曲,？在使用特定裂解緩沖液時,，或者一些植物或脂肪含量高的樣品中成分較復(fù)雜，會對電泳條帶產(chǎn)生干擾,；樣品變性不徹底,、有降解發(fā)生、修飾,、上樣過大等情況會導(dǎo)致拖帶,，凝膠不均勻,、電泳裝置滲漏、電壓/電流過大,、膠孔不平等原因會導(dǎo)致條帶彎曲,，當(dāng)很小分子量的蛋白電泳到接近凝膠下沿時也會出現(xiàn)條帶扭曲。第三方檢測實驗技術(shù)哪家強,？就找瑞普信,！

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磷酸化蛋白的WB第三方檢測在實操過程中有哪些注意事項？研究完某一蛋白的磷酸化情況后比較好也要研究一下該蛋白總的表達量,。如壓完 phospho-p38 抗體后,，我會把相同的 membrane 做 strip 后再壓 p38, 然后再 strip 一次，再壓內(nèi)標(biāo) actin ,。做磷酸化蛋白 WB 時,，除了目標(biāo)蛋白的 band 以外，往往會出現(xiàn)非特異性的 band. 磷酸化抗體不好的話,，甚至?xí)撼龇翘禺愋缘?band, 而沒有你想要的 band, 所以壓片以后,，一定要根據(jù) markers 比對一下，壓出的 band 分子量是否正確,。 磷酸化蛋白 WB 時 backgroud 也往往較深,，所以壓片時間要適當(dāng)，不能太長或過短,，太長則 backgroud 太深蓋住想要的那條 band, 時間過短則可能沒有 band 或者 band 太淺,。磷酸化蛋白 WB 時，要用TBST,，不能用PBST,。用 TBST 洗時也要注意一下，搖床的轉(zhuǎn)速不要太快,，洗的時間不要太長,，孵育一抗和二抗之后分別洗 5min 3 次即可，寧愿 background 深一些,，總比做不出來強得多 . 另外,，洗的時候，比較好不要把幾張 membrane 疊在一起洗,。西藏復(fù)蘇細胞第三方檢測公司

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