③待分離膠完全聚合后,，傾去其頂部的去離子水，用濾紙將水吸干,。④配制4％濃縮膠5mL,，加TEMED5μL,、10％APS50μL,，混勻立即灌膠,，灌至頂部,，并垂直插入Teflon齒梳,，室溫靜置20min待膠聚合,。⑤待膠完全聚合后拔出梳子，將凝膠置于電泳槽中,，加入電泳緩沖液，用電泳緩沖液沖洗上時間就是金錢,，效率就是生命唯有惜時才能成功,，唯有努力方可成就樣孔以去除氣泡。2電泳①取各個處理組蛋白提取液,，調(diào)整蛋白濃度為6μg/μL,，和等體積2上樣緩沖液混合,，即為上樣液,。②將上樣液于100℃沸水中煮沸5min,，使蛋白變性，冰上驟冷,，3000轉(zhuǎn)/min離心1min。③每孔加上樣液15μL,，留一孔加10μL預染的Marker,。加滿電泳緩沖液，蓋上槽蓋,，接通電源,，先用80v恒壓電泳，約20min,，當指示劑溴酚藍進入分離膠后改用110v恒壓電泳,，當指示劑到達距凝膠下端約處時關(guān)閉電源，取出膠板,。3轉(zhuǎn)印蛋白及免疫檢測①在電泳即將結(jié)束前,，預先將PVDF膜浸泡在甲醇中15s，然后用ddH2O漂洗2min,，浸泡于轉(zhuǎn)移緩沖液中5min后開始后續(xù)操作,。②在水中撬膠,，修膠后將膠浸泡于轉(zhuǎn)移緩沖液中平衡15min,。③按黑面（負極）→海綿→濾紙→膠→PVDF膜→濾紙→海綿→紅面（正極）的順序制備轉(zhuǎn)膜“三明治”,。瑞普信生物技術(shù)有限公司第三方檢測QPCR實驗,。西藏人ELISA第三方檢測中心

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