GSDME全長(zhǎng)蛋白在切割前是沒(méi)有活性的，N端和C端結(jié)構(gòu)域之間的分子內(nèi)相互作用調(diào)控自抑制。caspase-3可以將全長(zhǎng)GSDME,，剪切成有活性的N端（包含1-270a段的GSDME-N）和C端（GSDME-C）,。如果需檢測(cè)到N端或者C端的GSDME片段，細(xì)胞通常需要誘導(dǎo)處理,。在檢測(cè)GSDME全長(zhǎng)時(shí)需注意,，其表達(dá)水平因樣品類(lèi)型（組織和細(xì)胞）而異，可能在部分組織和細(xì)胞株系表達(dá),，其表達(dá)水平也存在差異,，因此需要對(duì)樣品處理和WB實(shí)驗(yàn)進(jìn)行一些優(yōu)化。建議設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照,。并且組織樣本成分更復(fù)雜,，在WB實(shí)驗(yàn)時(shí)可能出現(xiàn)多條條帶現(xiàn)象。瑞普信生物技術(shù)有限公司電放檢測(cè)實(shí)驗(yàn)真實(shí)嗎,？自貢第三方檢測(cè)公司

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“做miRNA下調(diào)，QPCR檢測(cè)miRNA,，表達(dá)水平無(wú)變化”如何解決呢,？反義核酸是在轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)揮功能，要阻斷miRNA的產(chǎn)生,，理想情況是在生成成熟的miRNA之前阻斷,。此要求目前唯有CRISPR/Cas9能實(shí)現(xiàn),，Cas9通過(guò)在pre-miRNA序列中引入突變,，從而破壞miRNA表達(dá)，是miRNA基因功能缺失研究的一種新方法。福建肖老師運(yùn)用Cas9技術(shù),，針對(duì)miR-21基因設(shè)計(jì)sgRNA,，通過(guò)慢病毒遞送細(xì)胞，并在RNA水平檢測(cè)到mir-21的下調(diào)表達(dá),，從而研究出miR-21耗竭對(duì)CNE2鼻咽（NPC）細(xì)胞生物學(xué)特性及其潛在機(jī)制的影響,。使用Cas9敲除miR-21之后，功能上也呈現(xiàn)出陽(yáng)性,，此外,，溫醫(yī)大醫(yī)院的張老師使用Cas9敲除mir-545，研究了人環(huán)狀RNAPRKCI（circPRKCI）通過(guò)抑制miR-545顯示致性,，促進(jìn)人類(lèi)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的病理進(jìn)展3,。所以，CRISPR/Cas9對(duì)于miRNA的KO是有效的,、被認(rèn)可的,、且以QPCR檢測(cè)表達(dá)量完全沒(méi)有問(wèn)題。自貢第三方檢測(cè)公司

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