PreScissionProtease（PSP）是一種在蛋白質(zhì)純化和分析中使用的酶，具有以下特點(diǎn)：1.**特異性識別**：PSP能在低溫（4°C）下特異性識別八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,，并在Gln和Gly之間進(jìn)行酶切,。2.**應(yīng)用**：PSP常用于去除融合蛋白中的GlutathioneS-transferase(GST)、His等標(biāo)簽,，有助于純化目的蛋白,。3.**純度高**：PSP的純度達(dá)到95%以上，確保了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性,。4.**穩(wěn)定性好**：PSP在含有50%甘油的儲存緩沖液中,，-80℃長期儲存，有效期2年,；小量分裝-20℃保存,，有效期6個月。5.**酶活定義**：在5℃條件下反應(yīng)16小時,，能夠切割100μg的GST標(biāo)簽蛋白達(dá)90%以上所需的酶量定義為一個活性單位,。6.**兼容性強(qiáng)**：PSP的酶切體系中可以兼容1%TritonX-100、Tween-20或NP-40,，10mMEDTA和500mMNaCl,。7.**注意事項(xiàng)**：某些化合物如100mMZnCl2、4mMAEBSF和100μMChymostatin會抑制PSP的酶活性50%以上,。8.**優(yōu)化酶切效率**：建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索實(shí)驗(yàn)濃度,，實(shí)際操作中，建議酶用量1:25-1:100U/μg融合蛋白,。E1通常被認(rèn)為是泛素化過程中的限速步驟,，因?yàn)樗婕暗椒核氐募て鸷虯TP的水解。Recombinant Mouse CD47 Protein,hFc Tag

在PCR實(shí)驗(yàn)中,，為了避免引物與已知序列的交叉反應(yīng),，從而確保實(shí)驗(yàn)的特異性,，以下是一些關(guān)鍵的引物設(shè)計原則和策略：1.**選擇高保守性區(qū)域**：引物比較好設(shè)計在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi)，這樣可以確保引物與目標(biāo)序列的特異性結(jié)合,。通過比較不同物種的同一基因序列,，可以確定基因的保守區(qū)。2.**避免引物與非目標(biāo)序列的同源性**：設(shè)計引物時,，應(yīng)避免與基因組中的重復(fù)序列,、假基因或高同源性區(qū)域設(shè)計引物?？梢酝ㄟ^BLAST等工具對引物進(jìn)行同源性分析,，確保引物只與目標(biāo)序列結(jié)合。3.**引物長度和GC含量**：引物長度一般在15-30堿基之間,，常用的是18-27bp,。GC含量一般為40%-60%，以45-55%為宜,。過高或過低的GC含量都不利于引發(fā)反應(yīng),，上下游引物的GC含量和Tm值應(yīng)保持接近。4.**避免引物的3'端錯配**：引物3'端的堿基應(yīng)嚴(yán)格要求配對,，特別是倒數(shù)第二個堿基,，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。引物3'端比較好不要選擇A,，比較好選擇T,，因?yàn)楫?dāng)末位鏈為T時，錯配的引發(fā)效率降低,。5.**避免引物自身及引物之間的互補(bǔ)序列**：引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列,，否則引物自身會折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，影響引物與模板的復(fù)性結(jié)合,。前后引物之間也不應(yīng)具有互補(bǔ)性,，尤其應(yīng)避免3'端的互補(bǔ)重疊以防止引物二聚體的形成。Recombinant Mouse CD45/PTPRC Protein,hFc Tag泛素蛋白是一種在真核細(xì)胞中存在的小分子蛋白質(zhì),，由76個氨基酸殘基組成,，具有高度的保守性。

PreScissionProtease（PSP）是一種由人鼻病毒14型的3C蛋白酶（humanrhinovirus(HRV)type143Cprotease）和GST組成的融合蛋白,。它具有以下特點(diǎn)：1.**特異性識別**：PreScissionProtease能在低溫下（4°C）特異識別短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,，并在Gln和Gly氨基酸殘基之間進(jìn)行酶切。2.**依賴結(jié)構(gòu)**：底物的識別和切割不僅依賴于融合蛋白的一級結(jié)構(gòu),，還依賴于融合蛋白的二級和三級結(jié)構(gòu),。3.**分離GST標(biāo)簽**：它可以特異性的將pGEX-6P系列等載體表達(dá)出的帶有酶底物識別多肽序列融合蛋白的GST標(biāo)簽進(jìn)行分離。4.**表達(dá)宿主**：本品由大腸桿菌中重組表達(dá),，并以無菌液體形式提供,。5.**物理性質(zhì)**：分子量約為46kDa，物理外觀為無菌無色液體,。6.**儲存緩沖液**：25mMTris-HCl（pH8.0）,，150mMNaCl，1mMEDTA,，5mMDTT,，50%（V/V）Glycerin。7.**酶切緩沖液**：10×酶切緩沖液為500mMTris-HCl（pH7.0）,，1.5MNaCl,，10mMEDTA，10mMDTT,。8.**純度**：經(jīng)SDS-PAGE及HPLC分析,，純度大于95%。9.**酶活定義**：在5℃條件下反應(yīng)16小時,，能夠切割10μg的GST標(biāo)簽的融合蛋白達(dá)90%以上所需的酶量定義為一個活性單位,。

EndoH糖苷內(nèi)切酶H在實(shí)驗(yàn)中的特異性和效率通常通過以下幾個方面來確定：1.**特異性識別**：EndoH能夠特異性地識別并切割高甘露糖型N-連接糖鏈，這些糖鏈通常存在于未成熟的糖蛋白中,。2.**切割位點(diǎn)**：EndoH識別并切割殼二糖結(jié)構(gòu)中的β-1,4-糖苷鍵連接的甘露糖型結(jié)構(gòu)糖鏈,，但不能切割復(fù)雜型糖鏈糖蛋白。3.**酶活性測試**：通過使用標(biāo)準(zhǔn)糖蛋白底物進(jìn)行酶活性測試,，可以確定EndoH的活性和效率,。4.**純化效果**：EndoH的純度可大于95%，這有助于確保實(shí)驗(yàn)中酶的高效性,。5.**比較分析**：與其他去糖基化酶（如PNGaseF）進(jìn)行比較分析,，可以評估EndoH的特異性和效率。6.**應(yīng)用效果**：EndoH用于基于DNA測序的熒光輔助糖電泳(DSA-FACE)分析核糖核酸酶B(ribonucleaseB,RNaseB)的糖基結(jié)構(gòu),，可以比較不同酶的糖基切割功能,。7.**酶切時間**：EndoH的酶切時間通常為1-3小時，這有助于評估酶的效率,。8.**產(chǎn)品信息**：通過查看產(chǎn)品信息,，包括產(chǎn)品編號、規(guī)格和目錄價,，可以了解EndoH的商業(yè)可用性和應(yīng)用范圍,。通過這些方法，研究人員可以確保EndoH在糖鏈分析中的特異性和效率,，從而獲得準(zhǔn)確的糖鏈結(jié)構(gòu)信息,。Cpf1是一種新發(fā)現(xiàn)的類2/型V CRISPR-Cas DNA內(nèi)切酶，在不同系統(tǒng)中顯示出一系列的活性,。

重組增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP）是一種用于生物科學(xué)研究的工具,。以下是重組EGFP的一些特點(diǎn)和應(yīng)用：1.**高熒光強(qiáng)度**：EGFP比野生型GFP具有更強(qiáng)的熒光,，這使得它在成像和檢測時更為敏感和有效。2.**改進(jìn)的折疊效率**：EGFP在生理溫度（如37℃）下的折疊效率更高,，這有助于在細(xì)胞內(nèi)快速形成成熟的熒光蛋白,。3.**單一激發(fā)峰**：與野生型GFP相比，EGFP具有單一的激發(fā)峰,，這簡化了成像條件的設(shè)置,，并提高了信號的穩(wěn)定性。4.**適合多種生物系統(tǒng)**：EGFP可以用于多種生物系統(tǒng),，包括細(xì)菌,、酵母、植物和哺乳動物細(xì)胞,。5.**多功能性**：EGFP可以作為報告基因用于基因表達(dá)分析,，也可以作為融合標(biāo)簽用于蛋白質(zhì)定位和動態(tài)研究。6.**非糖基化**：在大腸桿菌中表達(dá)的重組EGFP是非糖基化的,，這有助于減少翻譯后修飾的復(fù)雜性,。7.**純度高**：重組EGFP通常具有高純度，適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),。8.**穩(wěn)定性**：EGFP的熒光穩(wěn)定性好,，適合長時間觀察和成像。9.**分子量**：重組EGFP的分子量約為26.9kDa,，由239個氨基酸構(gòu)成,。UBE2L3與其他E2酶的區(qū)別在于它具有特定的結(jié)構(gòu)特征，它包含一個高度保守的UBC結(jié)構(gòu)域,，這是E2酶家族的標(biāo)志,。Recombinant Human DKK1 Protein,hFc Tag

研究表明，優(yōu)化后的Cas12a系統(tǒng)在多種細(xì)胞類型中表現(xiàn)出良好的編輯效率,。Recombinant Mouse CD47 Protein,hFc Tag

IdeSProtease是一種免疫球蛋白G（IgG）特異性降解酶,，它能夠在IgG的鉸鏈區(qū)下方的一個特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，產(chǎn)生F(ab')2和Fc片段,。這種酶是通過大腸桿菌（E.coli）表達(dá)系統(tǒng)重組表達(dá)生產(chǎn)的,，并且經(jīng)過分子改造，使其具有更高的酶活和更廣的底物特異性,。在生產(chǎn)過程中,，確保IdeSProtease符合GMP（良好生產(chǎn)規(guī)范）標(biāo)準(zhǔn)，需要進(jìn)行以下步驟：1.**分子改造**：通過分子生物學(xué)技術(shù)對IdeS進(jìn)行改造,，增強(qiáng)其穩(wěn)定性和比活性,。2.**大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)**：利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行IdeS的重組表達(dá)，確保無動物源性成分，減少病毒污染風(fēng)險,。3.**純化**：通過高度純化過程,，確保IdeS的純度達(dá)到≥95%。4.**酶活定義**：1個酶活力單位定義為在37°C條件下,，30分鐘內(nèi)酶切1μg重組單克隆IgG所需的酶量,。5.**質(zhì)量控制**：每批產(chǎn)品都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制，以確保產(chǎn)品批間穩(wěn)定性和高穩(wěn)定性,。6.**儲存條件**：采用適當(dāng)?shù)膬Υ鏃l件，如-30℃至-10℃凍存,，確保產(chǎn)品在有效期內(nèi)保持活性和穩(wěn)定性,。7.**微生物學(xué)安全性檢測**：進(jìn)行無菌檢測、體內(nèi)有毒物質(zhì)的檢測,、抗生物質(zhì)殘留檢測,、宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測和病毒安全性檢測，確保產(chǎn)品符合微生物學(xué)安全性要求,。