確保Cre重組酶只作用于特定細(xì)胞,,主要通過(guò)以下幾種方式實(shí)現(xiàn):1.**組織特異性啟動(dòng)子**:-利用組織特異性啟動(dòng)子控制Cre重組酶的表達(dá),,可以確保Cre酶只在特定組織或細(xì)胞中表達(dá)。這種方法通過(guò)將Cre基因置于特定細(xì)胞類型特有的啟動(dòng)子控制之下,,實(shí)現(xiàn)對(duì)Cre酶表達(dá)的精確控制,。2.**誘導(dǎo)型Cre重組酶系統(tǒng)**:-通過(guò)使用Cre-ERT(雌素受體突變體與Cre重組酶的融合蛋白),可以實(shí)現(xiàn)對(duì)Cre活性的時(shí)間控制,。在無(wú)他莫昔芬誘導(dǎo)時(shí),,Cre-ERT與熱激蛋白Hsp90結(jié)合,定位于細(xì)胞質(zhì)中,;當(dāng)他莫昔芬給藥誘導(dǎo)時(shí),,Hsp90脫離Cre-ERT,使Cre-ERT進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮基因重組的作用,。這種系統(tǒng)相當(dāng)于為Cre-Lox系統(tǒng)加裝了一個(gè)由他莫昔芬控制的外源開(kāi)關(guān),,使得體內(nèi)基因編輯更具時(shí)空靈活性。3.**藥物誘導(dǎo)的Cre系統(tǒng)**:-例如Tet-on系統(tǒng),,通過(guò)四環(huán)素或其衍生物多西環(huán)素的添加來(lái)激起基因表達(dá),。在三重轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中,,rtTA在特定啟動(dòng)子的控制下表達(dá),多西環(huán)素與rtTA結(jié)合,,Cre的表達(dá),,導(dǎo)致固定的報(bào)告基因重組。4.**AAV遞送Cre**:-利用包含組織特異性啟動(dòng)子的腺相關(guān)病毒(AAV)載體可以選擇性地將Cre重組酶遞送至特定細(xì)胞,。
Probe qPCR Mix (2×)通常含有熱啟動(dòng)DNA聚合酶,,這種聚合酶在高溫下激發(fā),可以減少非特異性擴(kuò)增 ,。Recombinant Biotinylated Human CCL5 Protein,His-Avi Tag
磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米顆粒固相核酸富集技術(shù)來(lái)純化質(zhì)粒DNA的產(chǎn)品,。它通常包括高性能納米磁珠和獨(dú)特的緩沖體系組合,通過(guò)裂解菌體后釋放的DNA,,能夠有效地結(jié)合于磁珠表面,,漂洗除雜后獲得高質(zhì)量的目的質(zhì)粒。以下是磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒的一些主要特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**快速簡(jiǎn)便**:操作步驟簡(jiǎn)單,,無(wú)需多次離心,,整個(gè)抽提過(guò)程通常只需20-25分鐘。2.**高得率和純度**:可以從1-5ml新鮮大腸桿菌菌液中分離純化2-20μg高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA,。純化得到的DNA質(zhì)量高,,完整性好,OD260/280比值一般為1.8~1.9之間,,OD260/230比值大于2.0,。3.**適用性廣**:適用于1-5mL小體積高通量菌液質(zhì)粒抽提,且抽提所得的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切,、測(cè)序,、文庫(kù)篩選、連接和轉(zhuǎn)化等各種下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),。4.**自動(dòng)化兼容**:可整合移液法自動(dòng)化儀器和磁棒法自動(dòng)化儀器進(jìn)行高通量提取實(shí)驗(yàn),。5.**安全性高**:操作過(guò)程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,更加環(huán)保和安全,。6.**成本效益**:相比傳統(tǒng)的離心柱法,,磁珠法可以減少離心次數(shù),獲得完整性更好的質(zhì)粒,,且操作更為簡(jiǎn)便快捷,。7.**操作靈活**:磁珠的使用量可靈活調(diào)節(jié),適合不同體積和濃度的樣品處理,。Recombinant Cynomolgus FGFR2 beta (IIIb) Protein,His Tag在這個(gè)過(guò)程中,,E1使用ATP的能量,在自身的活性位點(diǎn)的半胱氨酸殘基與泛素C末端的甘氨酸殘基形成硫酯鍵,。
使用BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads(血液基因組DNA提取試劑盒,,磁珠法)進(jìn)行血液樣本中基因組DNA的提取,,主要步驟如下:1.**實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備**:準(zhǔn)備抗凝全血樣本(如EDTA抗凝血),,移液器及無(wú)菌,,15ml離心管,無(wú)水乙醇,,70%乙醇,,干凈的吸水紙,渦旋振蕩器,,金屬浴/水浴,,臺(tái)式離心機(jī)等。2.**樣本處理**:取適量血液樣本,,根據(jù)試劑盒要求,,可能需要將血液體積調(diào)整至特定量,例如200μl,,并可能需要加入PBS緩沖液,。3.**裂解血液細(xì)胞**:向血液樣本中加入蛋白酶K和細(xì)胞裂解液,渦旋混勻后,,置于金屬浴或水浴中進(jìn)行裂解,,通常在65°C孵育10-15分鐘,并在此期間定期混勻,。4.**DNA與磁珠結(jié)合**:向裂解后的樣本中加入異丙醇和磁珠懸浮液,,渦旋混勻后,室溫放置一段時(shí)間,,以便于基因組DNA與磁珠結(jié)合,。5.**磁珠分離**:將樣本置于磁力架上,待磁珠聚集后,,小心移除上清液,,去除雜質(zhì)。6.**洗滌磁珠**:向磁珠中加入漂洗液和洗滌液,,進(jìn)行洗滌以去除殘留的蛋白質(zhì)和鹽分,,然后再次使用磁力架分離磁珠,移除洗滌液,。
Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease,,簡(jiǎn)稱λExonuclease)是一種具有特定特性和應(yīng)用的酶,以下是其主要特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**特異性作用**:λExonuclease是一種5'→3'核酸外切酶,,能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA,。2.**酶切活性**:對(duì)單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低,不能從DNA的切刻或缺口處起始消化,。3.**嗜磷酸性**:該酶具有非常強(qiáng)的嗜磷酸性,,磷酸化的核酸鏈與非磷酸化的核酸鏈的切割效率相差達(dá)200倍以上,。4.**切割效率**:Lambda核酸外切酶是一種具有高度持續(xù)性的堿性核酸外切酶,可以連續(xù)地將核酸切割成為單個(gè)堿基,,切割比較高速率可以達(dá)到1000nt/S,。5.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-生成單鏈PCR產(chǎn)物用于DNA測(cè)序。-DNA單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)分析,。-滾環(huán)擴(kuò)增,。-從雙鏈DNA片段生成單鏈DNA。-PCR產(chǎn)物的克隆,。-質(zhì)粒制備凈化,。6.**酶活性定義**:Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoproduce10nmolofacid-solubledeoxyribonucleotidefromdouble-strandedsubstrateinatotalreactionvolumeof50μlin30minutesat37oCin1XLambdaExonucleaseReactionBufferwith1μgsonicatedduplex[3H]-DNA。泛素分子可以通過(guò)其內(nèi)部的賴氨酸殘基(如Lys48)與其他泛素分子形成多聚泛素鏈,。
嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶I(BstDNAPolymeraseI)和它的大片段(LargeFragment)是兩種在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的酶,。它們的主要區(qū)別在于結(jié)構(gòu)和活性:1.**結(jié)構(gòu)**:-完整的BstDNAPolymeraseI包含一個(gè)5'→3'的核酸外切酶活性區(qū)域,而大片段是通過(guò)基因工程改造或蛋白酶處理去掉了這個(gè)外切酶活性區(qū)域的酶,。因此,,大片段沒(méi)有5'→3'的核酸外切酶活性,但保留了5'→3'的DNA聚合酶活性,。2.**活性**:-BstDNAPolymeraseI具有5'→3'的核酸外切酶活性,,這意味著它在合成DNA的同時(shí)可以“校對(duì)”錯(cuò)誤,切除不匹配的核苷酸,。而大片段由于缺少外切酶活性區(qū)域,,不具有這種校對(duì)能力。-大片段具有更強(qiáng)的鏈置換能力,,這使得它非常適合于等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),,如環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)和滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)。3.**應(yīng)用**:-BstDNAPolymeraseI由于具有校對(duì)功能,,可能更適合于需要高保真度的DNA合成反應(yīng),。-BstDNAPolymerase,LargeFragment由于其鏈置換能力,更適合于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),,這些技術(shù)不需要熱循環(huán)儀,,可以在恒定溫度下進(jìn)行DNA擴(kuò)增。4.**熱穩(wěn)定性**:-BstDNAPolymerase,LargeFragment通常在65°C左右的溫度下進(jìn)行反應(yīng),,而B(niǎo)stDNAPolymeraseI可能具有更寬的反應(yīng)溫度范圍,。盡管Ultra-Long Master Mix設(shè)計(jì)用于長(zhǎng)片段擴(kuò)增,但在某些情況下,,可能出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增,,需要通過(guò)優(yōu)化引物。Recombinant Human ICOS/CD278 Protein,hFc Tag
UDG在結(jié)構(gòu)上屬于單功能DNA糖基化酶,,它通過(guò)沿著DNA鏈滑動(dòng),,識(shí)別尿嘧啶分子,,進(jìn)行堿基切除。Recombinant Biotinylated Human CCL5 Protein,His-Avi Tag
耐高鹽全能核酸酶(SaltActiveUltraNuclease)是一種重組非特異性核酸內(nèi)切酶,,具有以下特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**來(lái)源與表達(dá)**:耐高鹽全能核酸酶來(lái)源于海洋微生物,,通過(guò)基因工程改造在大腸桿菌(_Escherichiacoli_)中表達(dá)純化。2.**活性條件**:在0.5MNaCl條件下具有比較好活性,,這使得它在高鹽環(huán)境下也能保持高效,。3.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-**病毒純化,、疫苗生產(chǎn)**:作為宿主殘留核酸去除試劑,,將宿主殘留核酸降至皮克(pg)級(jí)別,提高生物制品功效和安全性,。-**蛋白和多糖類制藥工業(yè)**:用于去除核酸污染,,降低細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解液的粘度,提高蛋白純化效率及功能研究,。-**防止細(xì)胞結(jié)團(tuán)**:有效防止細(xì)胞和疫苗研究中外周血單核細(xì)胞(PBMC)的結(jié)團(tuán),。4.**產(chǎn)品性質(zhì)**:-分子量:24.7kDa。-等電點(diǎn):9.61,。-純度:≥99%,。-酶活:250-300U/μL。-適溫度:37℃(工作范圍0-42℃),。-輔助因子:1-10mMMg2+,。5.**儲(chǔ)存條件**:以無(wú)菌液體酶的形式提供,儲(chǔ)存于緩沖液(25mMTris-HCl,,5mMMgCl2,,500mMNaCl,50%Glycerol,,pH7.5)中,,無(wú)色透明液體。干冰運(yùn)輸,,-15℃~-25℃保存,,有效期2年。Recombinant Biotinylated Human CCL5 Protein,His-Avi Tag