BstDNA聚合酶和TaqDNA聚合酶在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中都是常用的酶,,但它們之間存在一些關(guān)鍵的不同點(diǎn):1.**來源和熱穩(wěn)定性**:-**TaqDNA聚合酶**來源于嗜熱菌Thermusaquaticus,具有很好的耐熱性,能夠承受PCR的熱變性步驟。-**BstDNA聚合酶**來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus),同樣具有較高的熱穩(wěn)定性,,適用于等溫?cái)U(kuò)增,如LAMP技術(shù),無需PCR熱循環(huán),。2.**酶活性**:-**TaqDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和5'-3'外切酶活性,但沒有3'-5'外切酶活性,。這意味著它在DNA合成過程中可以校正一些錯(cuò)誤,,但保真性相對較低。-**BstDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和強(qiáng)鏈置換活性,,但缺乏5'-3'外切酶活性,。這使得它在等溫?cái)U(kuò)增中更為有效,尤其是在需要高保真度和快速擴(kuò)增的應(yīng)用中,。3.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-**TaqDNA聚合酶**主要用于PCR技術(shù),,適用于各種DNA片段的擴(kuò)增,包括復(fù)雜模板和長片段的擴(kuò)增,。-**BstDNA聚合酶**特別適用于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),,如LAMP,,這些技術(shù)不需要溫度循環(huán),適用于快速,、低成本的DNA擴(kuò)增,。4.**擴(kuò)增速度和效率**:-**BstDNA聚合酶**在等溫?cái)U(kuò)增中顯示出比傳統(tǒng)TaqDNA聚合酶更快的擴(kuò)增速度和更高的產(chǎn)量,尤其是在優(yōu)化的LAMP反應(yīng)中,。
耐高鹽全能核酸酶(SaltActiveUltraNuclease)是一種重組非特異性核酸內(nèi)切酶,,具有以下特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**來源與表達(dá)**:耐高鹽全能核酸酶來源于海洋微生物,通過基因工程改造在大腸桿菌(_Escherichiacoli_)中表達(dá)純化,。2.**活性條件**:在0.5MNaCl條件下具有比較好活性,,這使得它在高鹽環(huán)境下也能保持高效。3.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-**病毒純化,、疫苗生產(chǎn)**:作為宿主殘留核酸去除試劑,,將宿主殘留核酸降至皮克(pg)級(jí)別,提高生物制品功效和安全性,。-**蛋白和多糖類制藥工業(yè)**:用于去除核酸污染,,降低細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解液的粘度,提高蛋白純化效率及功能研究,。-**防止細(xì)胞結(jié)團(tuán)**:有效防止細(xì)胞和疫苗研究中外周血單核細(xì)胞(PBMC)的結(jié)團(tuán),。4.**產(chǎn)品性質(zhì)**:-分子量:24.7kDa。-等電點(diǎn):9.61,。-純度:≥99%,。-酶活:250-300U/μL。-適溫度:37℃(工作范圍0-42℃),。-輔助因子:1-10mMMg2+,。5.**儲(chǔ)存條件**:以無菌液體酶的形式提供,儲(chǔ)存于緩沖液(25mMTris-HCl,,5mMMgCl2,,500mMNaCl,50%Glycerol,,pH7.5)中,,無色透明液體。干冰運(yùn)輸,,-15℃~-25℃保存,,有效期2年。T7 RNA聚合酶UBE2L3與其他E2酶的區(qū)別在于它具有特定的結(jié)構(gòu)特征,,它包含一個(gè)高度保守的UBC結(jié)構(gòu)域,,這是E2酶家族的標(biāo)志,。
磁珠法在基因克隆中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.**質(zhì)粒DNA的提取**:磁珠法可以用于從細(xì)菌細(xì)胞中提取質(zhì)粒DNA,這對于質(zhì)粒的克隆和表達(dá)至關(guān)重要,。通過磁珠法提取的質(zhì)粒DNA純度高,,適合用于后續(xù)的酶切,、連接,、轉(zhuǎn)化等分子克隆步驟。2.**基因組DNA的提取**:磁珠法可以用于從各種生物樣本中提取基因組DNA,,這對于基因組的克隆和分析非常重要,。提取的基因組DNA可以用于PCR擴(kuò)增、基因表達(dá)分析,、基因突變檢測等,。3.**mRNA的提取和純化**:在mRNA克隆中,磁珠法可以用于提取和純化mRNA,,這對于cDNA的合成和基因表達(dá)分析非常關(guān)鍵,。磁珠法提取的mRNA純度高,可以用于后續(xù)的cDNA合成和RT-PCR等實(shí)驗(yàn),。4.**PCR產(chǎn)物的純化**:磁珠法可以用于純化PCR產(chǎn)物,,去除反應(yīng)中的酶、dNTPs和其他雜質(zhì),,為克隆PCR產(chǎn)物提供高純度的DNA模板,。5.**DNA片段的篩選和回收**:在基因克隆過程中,可能需要從多個(gè)DNA片段中篩選出特定大小或序列的片段,。磁珠法可以用于DNA片段的篩選和回收,,提高克隆效率。6.**自動(dòng)化和高通量操作**:磁珠法易于與自動(dòng)化設(shè)備結(jié)合,,適合高通量樣本處理,,這對于大規(guī)模基因克隆項(xiàng)目尤為重要,。自動(dòng)化操作減少了人為操作誤差,,提高了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和可靠性。
磁珠法病毒RNA/DNA抽提試劑盒是一種高效,、便捷的工具,,適用于從各種生物樣本中提取病毒核酸。以下是一些相關(guān)產(chǎn)品的信息和特點(diǎn):1.**德諾優(yōu)品病毒DNA/RNA提取試劑盒**:-采用自主磁珠純化技術(shù),,適合從血漿,、血清等樣本中分離純化病毒的DNA或RNA。-操作簡單,,整個(gè)過程可在12-25分鐘內(nèi)完成,,提取的核酸可直接用于下游應(yīng)用,,如PCR和NGS等。-提取的核酸純度高,,質(zhì)量穩(wěn)定可靠,,適合低拷貝數(shù)的病毒檢測。2.**MolPure®磁珠法病毒DNA/RNA提取試劑盒**:-適用于從全血,、血清,、腦脊液等樣本中提取病毒核酸。-無需使用有毒的酚氯仿,,安全快捷,,提取過程可在40分鐘內(nèi)完成。-提取的產(chǎn)物可直接用于PCR,、qPCR等實(shí)驗(yàn),。3.**FineMag快速磁珠法病毒DNA/RNA提取試劑盒**:-適合從全血、唾液,、拭子等樣本中純化高質(zhì)量病毒核酸,,提取過程只需13分鐘。-無需使用有毒的化學(xué)試劑,,操作安全便捷,。4.**MagMAX病毒RNA/DNA提取試劑盒**:-適用于從全血、血清,、口腔液等樣本中提取病毒核酸,。-該試劑盒支持高通量提取,適合自動(dòng)化操作,,提取效率高,,適合直接用于PCR和RT-PCR。
T5核酸外切酶在基因編輯中確實(shí)有應(yīng)用,并且具有一些優(yōu)勢:1.**提高編輯效率**:根據(jù)一篇研究文章,,T5核酸外切酶可以與CRISPR/Cas系統(tǒng)共表達(dá)或融合,,以提高基因編輯的效率。這種共表達(dá)或融合可以增加indel(插入和缺失)頻率,,盡管增加的幅度可能不大,。2.**增強(qiáng)基因編輯效果**:在另一項(xiàng)研究中,通過使用螺旋-螺旋二聚體肽(coiled-coilpeptides)將T5核酸外切酶招募到Cas9或Cas12a蛋白上,,可以提高基因編輯的效率,,這種方法被稱為CCExo(CRISPR-Coiled-coil-Exonuclease)。這種招募方式優(yōu)于共表達(dá)和直接融合,,其中強(qiáng)的親和力CC對顯示出高的突變頻率和刪除長度,。3.**應(yīng)用于多種細(xì)胞類型**:CCExo系統(tǒng)在多種細(xì)胞系和原代細(xì)胞中都能有效地提高基因失活效率,,并且在慢性髓性白血病(CML)患者的原代細(xì)胞以及異種移植動(dòng)物模型中展示了其應(yīng)用潛力,,這表明CCExo方法可能成為CML和其他遺傳性疾病的潛在選擇,。T5核酸外切酶與CRISPR核酸酶蛋白進(jìn)行融合,并引入了核定位信號(hào)(NLS)序列以構(gòu)建表達(dá)載體,,用于基因編輯,。綜上所述,T5核酸外切酶在基因編輯中的應(yīng)用可以增強(qiáng)編輯效率和效果,,尤其是在與CRISPR/Cas系統(tǒng)結(jié)合使用時(shí),。T4 DNA 聚合酶相對不耐熱,,在 70℃加熱 10 分鐘可使 T4 DNA 聚合酶失活,,因此在實(shí)驗(yàn)操作過程中需要注意溫度。Recombinant Human CD160 (His-Avi Tag)
Probe qPCR Mix (2×)通常含有熱啟動(dòng)DNA聚合酶,,這種聚合酶在高溫下激發(fā),,可以減少非特異性擴(kuò)增 。Recombinant Human PS20 Protein,His Tag
5'-3'外切核酸酶活性是指DNA聚合酶能夠從DNA鏈的5'端向3'端切除核苷酸的能力,。這種活性通常用于修復(fù)受損的DNA或去除錯(cuò)誤配對的核苷酸,。具體來說,5'-3'外切核酸酶活性可以在DNA合成過程中切除前方的核苷酸,,幫助錯(cuò)誤或不需要的序列,,從而確保DNA的正確復(fù)制和修復(fù)。在DNA聚合酶中,,5'-3'外切核酸酶活性與聚合酶活性相輔相成,。聚合酶在合成新鏈時(shí),5'-3'外切酶活性可以在發(fā)現(xiàn)錯(cuò)誤時(shí)進(jìn)行修正,,確保合成的DNA鏈的準(zhǔn)確性,。例如,E.coliDNA聚合酶I具有這種外切酶活性,,可以在合成過程中去除錯(cuò)誤的核苷酸,,從而提高DNA的保真度。需要注意的是,,BstDNAPolymerase,LargeFragment不具有5'-3'外切核酸酶活性,,這使得它在某些應(yīng)用中更為穩(wěn)定,特別是在等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)中,,如LAMP(環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增)和RCA(滾環(huán)擴(kuò)增)等,。Recombinant Human PS20 Protein,His Tag