為了確定探針是否與相應(yīng)的基因組DNA雜交,有必要對(duì)探針加以標(biāo)記,,以便在結(jié)合部位獲得可識(shí)別的信號(hào),通常采用放射性同位素32P標(biāo)記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來(lái)已發(fā)展了一些用非同位素如生物素-親合素系統(tǒng),、地高辛配體等作為標(biāo)記物的方法,。非同位素標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)是保存時(shí)間較長(zhǎng),而且避免了同位素的污染。**常用的探針標(biāo)記法是缺口平移法(nick translation),。首先用適當(dāng)濃度的DNA酶Ⅰ(DNAseⅠ)在探針DNA雙鏈上造成缺口,,然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ(DNa poly merasⅠ)的5’→3’的外切酶活性,切去帶有5’磷酸的核苷酸,;同時(shí)又利用該酶的5’→3’聚酶活性,,使32P標(biāo)記的互補(bǔ)核苷酸補(bǔ)入缺口,,DNA聚合酶Ⅰ的這兩種活性的交替作用,使缺口不斷向3’的方向移動(dòng),,同時(shí)DNA鏈上的核苷酸不斷為32P標(biāo)記的核苷酸所取代,。電子探針是運(yùn)用電子所形成的探測(cè)針(細(xì)電子束)作為X射線的激發(fā)源來(lái)進(jìn)行顯微X射線光譜分析的儀器。金山區(qū)挑選探針售價(jià)
禽流感基因探針制備探針濃度鑒定將禽流感病毒H9N2亞型毒株**白(NP)基因3′端較為保守的,、約350bp的編碼序列通過(guò)限制性內(nèi)切酶Hae¸切割,、分離后,用隨機(jī)引物法制備Digoxigenin2112dUTP標(biāo)記探針。測(cè)定該探針的濃度為100Lgöml,。特異性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該探針只能與實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的,、含有NP基因的重組載體pGEM2TE2NP和pBacPAK2NP以及A型流感病毒H9N2亞型、H3N2亞型以及H9N3亞型毒株基因組RNA結(jié)合出現(xiàn)特異性的顏色反應(yīng),而與實(shí)驗(yàn)室常用的載體pGEM2Teasy,、pBacPAK2His3,、pTARGET和pGEMEX22以及新城疫病毒、傳染***毒和傳染性喉氣管炎病毒基因組不發(fā)生反應(yīng),。應(yīng)用該探針檢測(cè)含NP基因的重組載體和重組病毒證明該探針是有效的,可用于含禽流感病毒樣品或材料的檢測(cè),。金山區(qū)挑選探針售價(jià)波譜儀的關(guān)鍵在于怎樣實(shí)現(xiàn)將未知的特征譜線與已知元素Z聯(lián)系起來(lái)?
電子探針X射線顯微分析儀(簡(jiǎn)稱電子探針)利用約1Pm的細(xì)焦電子束,,在樣品表層微區(qū)內(nèi)激發(fā)元素的特征X射線,,根據(jù)特征X射線的波長(zhǎng)和強(qiáng)度,進(jìn)行微區(qū)化學(xué)成分定性或定量分析,。電子探針的光學(xué)系統(tǒng),、真空系統(tǒng)等部分與掃描電鏡基本相同,通常也配有二次電子和背散射電子信號(hào)檢測(cè)器,,同時(shí)兼有組織形貌和微區(qū)成分分析兩方面的功能,。電子探針的構(gòu)成除了與掃描電鏡結(jié)構(gòu)相似的主機(jī)系統(tǒng)以外,還主要包括分光系統(tǒng),、檢測(cè)系統(tǒng)等部分,。電子探針主要由電子光學(xué)系統(tǒng)(鏡筒),X射線譜儀和信息記錄顯示系統(tǒng)組成,。電子探針和掃描電鏡在電子光學(xué)系統(tǒng)的構(gòu)造基本相同,,它們常常組合成單一的儀器。
這樣我們可以事先建立一系列θ角與相應(yīng)元素的對(duì)應(yīng)關(guān)系,,當(dāng)某個(gè)由電子束激發(fā)的X特征射線照射到分光晶體上時(shí),,我們可在與入射方向交成2θ角的相應(yīng)方向上接收到該波長(zhǎng)的X射線信號(hào),同時(shí)也就測(cè)出了對(duì)應(yīng)的化學(xué)元素,。只要令探測(cè)器連續(xù)進(jìn)行2θ角的掃描,,即可在整個(gè)元素范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)連續(xù)測(cè)量。由分光晶體所分散的單一波長(zhǎng)X射線被X射線檢測(cè)器接受,,常用的檢測(cè)器一般是正比計(jì)數(shù)器,。當(dāng)某一X射線光子進(jìn)入計(jì)數(shù)管后,,管內(nèi)氣體電離,并在電場(chǎng)作用下產(chǎn)生電脈沖信號(hào),。電子探針主要由電子光學(xué)系統(tǒng)(鏡筒),,X射線譜儀和信息記錄顯示系統(tǒng)組成。
探針的標(biāo)記方式有放射性標(biāo)記和非放射性標(biāo)記,。標(biāo)記物質(zhì)有放射性元素(如32P等)和非放射性物質(zhì)(如生物素,、地高辛等)。32P是**常用的核苷酸標(biāo)記同位素,,被標(biāo)記的dNTP本身就帶有磷酸基團(tuán),,便于標(biāo)記。特點(diǎn)是比活性高,,可達(dá)9000Ci/mmol,;發(fā)射的β射線能量高。用它標(biāo)記的探針自顯影時(shí)間短,,靈敏度高,。32P的半壽期短,雖使用不方便,,但為廢棄物的處理減輕了壓力,。非放射性標(biāo)記法有酶標(biāo)法和化學(xué)物標(biāo)記法。酶標(biāo)方法與免疫測(cè)定ELISA方法相似,,只是被標(biāo)記的核酸代替了被標(biāo)記的抗體,,事實(shí)上被標(biāo)記的抗體也稱為探針,現(xiàn)有許多商品是生物素,、地高辛標(biāo)記的,。對(duì)于任意一個(gè)給定的入射角θ有一個(gè)確定的波長(zhǎng)λ滿足衍射條件。金山區(qū)挑選探針售價(jià)
利用探針盒子獲取他人手機(jī)號(hào)等隱私信息的行為涉嫌侵犯他人隱私,,可能面臨民事侵權(quán)責(zé)任及治安管理處罰責(zé)任,。金山區(qū)挑選探針售價(jià)
在不損耗試樣的情況下,電子探針通常能分析直徑和深度不小于1微米范圍內(nèi),、原子序數(shù)4以上的所有元素,;但是對(duì)原子序數(shù)小于12的元素,其靈敏度較差,。常規(guī)分析的典型檢測(cè)相對(duì)靈敏度為萬(wàn)分之一,,在有些情況下可達(dá)十萬(wàn)分之一。檢測(cè)的***靈敏度因元素而異,,一般為10-14~10-16克。用這種方法可以方便地進(jìn)行點(diǎn),、線,、面上的元素分析,,并獲得元素分布的圖象。對(duì)原子序數(shù)高于10,、濃度高于10%的元素,,定量分析的相對(duì)精度優(yōu)于±2%。電子探針儀是 X射線光譜學(xué)與電子光學(xué)技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的,。1948年法國(guó)的R.卡斯坦制造了***臺(tái)電子探針儀,。1958年法國(guó)首先制造出商品儀器。電子探針儀與掃描電子顯微鏡在結(jié)構(gòu)上有許多共同處,。70年代以來(lái)生產(chǎn)的電子探針儀上一般都帶有掃描電子顯微鏡功能,,有的還附加另一些附件,使之除作微區(qū)成分分析外,,還能觀察和研究微觀形貌,、晶體結(jié)構(gòu)等。金山區(qū)挑選探針售價(jià)
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