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薄膜微流控PCR熒光檢測

來源: 發(fā)布時間:2024-04-24

PCR的工作原理:在TaqDNA聚合酶(熱穩(wěn)定DNA聚合酶)的作用下,由一對特異性引物經(jīng)熱變性-退火-延伸反應(yīng),,三個不同溫度的循環(huán)處理使得DNA由少量擴(kuò)增到多量的一種體外DNA擴(kuò)增技術(shù),。在反應(yīng)體系內(nèi),以一對人工合成的寡核苷酸作為擴(kuò)增引物,,第一步,,模板DNA變性,以構(gòu)成脫氧核糖核酸的四種脫氧核苷酸為底物,,目的基因作為模板,,在DNA聚合酶的作用下模板DNA經(jīng)過80-90℃高溫變性,,使模板DNA雙鏈經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈解離成單鏈。第二步,,模板DNA與引物退火(復(fù)性),,模板DNA解離成單鏈后溫度降至50-60℃,引物與模板DNA單鏈互補(bǔ)配對,。第三步,,引物的延伸,DNA模板-引物結(jié)合物在DNA聚合酶作用下,,70-75℃以dNTP為反應(yīng)原料半保留復(fù)制合成一條新的模板DNA鏈,。這三個步驟為一個循環(huán),2-4分鐘即可完成一個循環(huán),,2-3小時就能使極微量的DNA,、片段、甚至單拷貝基因復(fù)制到幾百萬倍,,從而實(shí)現(xiàn)對靶DNA的放大,。由于擴(kuò)增堿基序列按照靶DNA復(fù)制,因此PCR反應(yīng)具有高度特異性,。巧亦捷采用的薄膜微流控技術(shù)與核酸檢測技術(shù)相結(jié)合,,特別適用于基因表達(dá)和病原體檢測等領(lǐng)域。薄膜微流控PCR熒光檢測

薄膜微流控PCR熒光檢測,PCR

目前市面上有很多PCR儀器,,一時間讓獸醫(yī)師無從選擇,,但大多數(shù)都是PCR擴(kuò)增儀,,即需要人工進(jìn)行核酸提取和純化,。他們都有以下痛點(diǎn):1、核酸提取和純化的操作麻煩并且需要專業(yè)的技術(shù)人員和場地,,有些還需要配置高速離心機(jī),,人工核酸提取需要30~40分鐘并容易導(dǎo)致污染。2,、人工反復(fù)開蓋加入或倒出試劑,,容易導(dǎo)致人為和氣溶膠污染,導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確,。因此針對寵物醫(yī)院來說,,需要一臺集核酸提取、純化和擴(kuò)增為一體的全自動核酸檢測儀,。能更好的控制人工成本及試劑成本,。蘇州寵物PCR儀器生產(chǎn)企業(yè)巧亦捷核酸檢測解決方案包括全自動便攜式核酸檢測一體機(jī)、免核酸提取檢測試劑盒,。

薄膜微流控PCR熒光檢測,PCR

巧亦捷核酸一體機(jī)采用的探針法熒光PCR與常規(guī)PCR的不同之處在于:在上,、下游引物外還加入了具有序列特異性的探針(探針本身具有熒光標(biāo)記),,該探針根據(jù)需要擴(kuò)增的靶序列設(shè)計(jì)因此只能與待檢測序列結(jié)合,與染料法相比提高了實(shí)驗(yàn)的特異性,。目前市場上的探針主要種類有:TaqMan,、MolecularBeacon、Scorpions,、Hybirdization等,,其中以TaqMan探針應(yīng)用寬泛。TaqMan探針的結(jié)構(gòu):長度與普通PCR引物類似,,大約20bp左右,。在5’與3’端各標(biāo)記有一個熒光基團(tuán),5’的熒光基團(tuán)稱為報(bào)告基團(tuán)(Report),,3’的熒光基團(tuán)稱為淬滅基團(tuán)(Quencher),。TaqMan探針的性能:在探針結(jié)構(gòu)完整的情況下用特定的波長激發(fā)報(bào)告基團(tuán),由于報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)的空間位置很近,,因此報(bào)告基團(tuán)能夠通過FRET(FluorescenceResonanceEnergyTransfer)將接受的能量轉(zhuǎn)移到淬滅基團(tuán),,使后者以發(fā)射熒光或熱量的方式釋放能量,而報(bào)告基團(tuán)并不發(fā)射特定波長的熒光信號,。

當(dāng)犬貓的一些疾病處于潛伏期時,,該階段動物體內(nèi)的病原體含量過低。而目前市場上的一些檢測工具主要檢測寵物體內(nèi)是否產(chǎn)生對抗某種病原的抗體,,雖然快速,,但在初期傳染時,寵物免疫系統(tǒng)尚未產(chǎn)生抗體,,所以檢測出現(xiàn)偽陰性,,進(jìn)而延誤診療。巧亦捷薄膜微流控快速核酸一體機(jī)則可以很好的解決這一問題,,即便處于疾病潛伏期,,巧亦捷核酸一體機(jī)也可以得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果,做到早期診斷,,實(shí)現(xiàn)及時診療,,減少患病動物痛苦,獲得更好的療效,。預(yù)后評估,,監(jiān)控診療效果。巧亦捷核酸檢測一體機(jī)的靈敏性和特異性上的優(yōu)勢,,像犬貓的呼吸道,、消化道和貧血等疾病的診斷和鑒別診斷。

薄膜微流控PCR熒光檢測,PCR

巧亦捷(ingeNova)是翊新診斷技術(shù)(蘇州)有限公司旗下專注于動物體外診斷檢測的產(chǎn)品品牌,,以翊新診斷全資子公司——蘇州翊創(chuàng)生物科技有限公司為主體,。巧亦捷系列產(chǎn)品覆蓋了貓呼吸道疫病檢測,、貓消化道疫病檢測、犬消化道疫病檢測,、寄生蟲等寵物核酸檢測,,非洲豬瘟、藍(lán)耳等豬病核酸檢測,,牛逼支,、牛腹瀉等牛羊類食品動物的核酸檢測,人畜共患病核酸檢測,,以及魚蝦等水生動物的核酸檢測,。全自動薄膜微流控核酸檢測一體機(jī)是巧亦捷系列產(chǎn)品的主打檢測平臺,巧亦捷基于此平臺技術(shù)致力于為客戶提供快速,、精確的動物疫病診斷整體解決方案,。翊新診斷技術(shù)(蘇州)有限公司由微流控技術(shù)領(lǐng)域國際**周朋博士創(chuàng)立。公司依托先進(jìn)的薄膜微流控技術(shù)開發(fā)一體化,、智能化的快速,、便捷的POCT體外分子診斷解決方案。針對動物疫病的早期診斷,,公司以市場需求為出發(fā)點(diǎn),,開發(fā)出了低成本、無污染,、能夠?qū)崿F(xiàn)真正意義上“全自動,,全封閉,樣本進(jìn),,結(jié)果出”的薄膜微流控芯片技術(shù)和可以用于動物疫病現(xiàn)場快速診斷的分子檢測系統(tǒng),,從而為動物疫病的現(xiàn)場診斷提供更加便利的檢測手段。目前已開發(fā)非洲豬瘟檢測,、寵物呼吸道多聯(lián)檢測,、寵物消化道多聯(lián)檢測等多種試劑及檢測方案,??朔渌麢z測方法的缺點(diǎn)與目前臨床上已有的大部分病原檢測方法相比,巧亦捷核酸檢測一體機(jī)都有其獨(dú)特優(yōu)勢,。蘇州寵物PCR儀器生產(chǎn)企業(yè)

PCR是可以做到病原體準(zhǔn)確診斷的技術(shù),,與膠體金試紙及熒光定量試紙的應(yīng)用場景相同。薄膜微流控PCR熒光檢測

大多數(shù)寵物醫(yī)院運(yùn)用的診斷方法為:PCR和試紙條,。其區(qū)別是:試紙條原理是基于抗體抗原的免疫學(xué)方法,,通過顏色或熒光標(biāo)記來判讀,和PCR檢測是基于不同方法學(xué)的檢測方式,。PCR通過檢測樣本中有無病毒DNA(RNA)來確診,,靈敏度高,、特異性強(qiáng)、支持檢測項(xiàng)目多,,是人醫(yī)醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的診斷金標(biāo)準(zhǔn),,兩者區(qū)別可以理解為滴血認(rèn)親(免疫學(xué)方法)與親子鑒定(分子診斷)的區(qū)別。目前專業(yè)的的寵物疾病機(jī)構(gòu)就是使用PCR檢測,。巧亦捷核酸檢測一體機(jī)采用國際**的薄膜微流控技術(shù),,實(shí)現(xiàn)了從核酸提取、PCR擴(kuò)增,、熒光檢測全流程自動化芯片內(nèi)完成,,可以實(shí)現(xiàn)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室級別的核酸檢測,且檢測時間短,,全程無需專業(yè)技術(shù)人員參與,,可實(shí)現(xiàn)基于病癥的多項(xiàng)目聯(lián)檢,更適合寵物醫(yī)院,、獸醫(yī)站,、養(yǎng)殖場等現(xiàn)場快檢應(yīng)用場景。薄膜微流控PCR熒光檢測