10X Genomics和Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理,。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,一列縱向孔道輸入細(xì)胞,,凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上,,并通過微流控技術(shù),將之輸入到第二縱向孔道,,即油相孔道中,。這時(shí)候,就形成了一個(gè)個(gè)油滴并輸出并收集在EP管中,。每一個(gè)油滴中會落入一個(gè)細(xì)胞以及一個(gè)凝膠微珠,那么在每一個(gè)凝膠微珠中上長滿了不同的Cell Barcode和UMI Barcode連接形成的序列,,再加上一端PolyT的抓手,,構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠。而這個(gè)凝膠微珠抓手就會使用oligo dT抓住mRNA構(gòu)建文庫,。烈冰測序服務(wù)已助力300余篇國際期刊研究文章發(fā)表,。長沙10X Genomics單細(xì)胞測序服務(wù)機(jī)構(gòu)
針對單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析時(shí)的reads數(shù)、基因表達(dá)量及細(xì)胞數(shù)量判定過程中:以捕獲5000個(gè)細(xì)胞,、100G的測序量為標(biāo)準(zhǔn),,每個(gè)細(xì)胞的reads數(shù)大約在50k左右;每個(gè)細(xì)胞的基因中位數(shù)取決于樣本的細(xì)胞類型,,例如成熟的B,,T,粒細(xì)胞數(shù)量較多的組織中,,由于該類型細(xì)胞表達(dá)的基因數(shù)普遍較少,,導(dǎo)致基因中位數(shù)下降,。而某些疾病組織、或者體外培養(yǎng)的如干細(xì)胞等,,他們的基因表達(dá)數(shù)較高,,甚至可以超過1W,這就導(dǎo)致該類樣本基因中位數(shù)非常高,。因此,,我們對細(xì)胞數(shù)量以及基因中位數(shù)確認(rèn)時(shí),需要考察實(shí)際組織的細(xì)胞組成,。沈陽單細(xì)胞測序技術(shù)支持十二年測序經(jīng)驗(yàn),,烈冰生物單細(xì)胞多組學(xué)領(lǐng)域的佼佼者。
烈冰科技于2010年誕生之初便立足于高通量測序行業(yè),,為科研學(xué)者提供專注的測序數(shù)據(jù)分析服務(wù),,先后經(jīng)歷基因芯片時(shí)代、基因測序,、轉(zhuǎn)錄組測序時(shí)代...在科技日新月異的洪流中始終獨(dú)占鰲頭,。2018年以來,單細(xì)胞測序進(jìn)入發(fā)展的快車道,,烈冰作為國內(nèi)首批引進(jìn)單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)雙平臺的公司,,依托自主研發(fā)的NovelBrain?生物大數(shù)據(jù)分析平臺,為用戶提供一站式全流程的單細(xì)胞測序服務(wù)和解決方案,。4年的單細(xì)胞技術(shù)的積累,,烈冰已具備大鼠、小鼠,、斑馬魚,、猴、裸鼴鼠,、水稻,、擬南芥等10+物種,皮膚,、腦,、脂肪、心臟,、花序等50+組織類型,,100+細(xì)胞類型,1000+靶標(biāo)基因,,10000+樣本處理經(jīng)驗(yàn),。
樣本制備后的保存 為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化,在對細(xì)胞進(jìn)行清洗和計(jì)數(shù)后,,單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保存于冰上,,直至用于后續(xù)的上機(jī)和文庫制備步驟,。在理想狀況下,一旦制備好樣本,,應(yīng)當(dāng)在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟,。然而,您還有必要了解各類細(xì)胞的不同性質(zhì),,因?yàn)檫@可能會影響細(xì)胞應(yīng)在冰上保存的時(shí)間,,以及它們在制備后多久便應(yīng)當(dāng)被盡快使用。例如,,有些細(xì)胞(如PBMC)如果在冰上放置一段時(shí)間,,它們就開始形成團(tuán)塊。這些團(tuán)塊很難解離,,增加了堵塞的風(fēng)險(xiǎn),,而且每個(gè)團(tuán)塊被當(dāng)成單細(xì)胞計(jì)數(shù),又降低了細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,。此外,,有些細(xì)胞更加粘稠,形成團(tuán)塊的速度更快,。對于這些細(xì)胞,,必須盡量減少制備和使用之間的時(shí)間差。個(gè)性化制定測序項(xiàng)目方面,,滿足從檢測基因到蛋白的多組學(xué)測序要求,。
單細(xì)胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR(RT-qPCR)都采用一個(gè)共同過程,,即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析,。不過,每種分析在開展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同,。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA,,然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA。RNA-seq是使用cDNA來構(gòu)建新一代測序文庫,,從而測定整個(gè)轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá)。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點(diǎn),,并通過熒光測定表達(dá)水平,。RT-qPCR限于已知靶點(diǎn),而RNA-seq可實(shí)現(xiàn)無偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析,。然而,,這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或單個(gè)微反應(yīng)容器中,。然后用細(xì)胞特異性的條形碼標(biāo)記RNA,,確保來自每個(gè)細(xì)胞的cDNA可以追溯到起源細(xì)胞,。與RNA-seq相似,帶有條形碼的cDNA也被用于構(gòu)建新一代測序文庫,,從而能夠?qū)γ總€(gè)細(xì)胞的整個(gè)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行基因表達(dá)測定,。全線搭建10x Genomics單細(xì)胞測序平臺。重慶高通量測序單細(xì)胞測序服務(wù)機(jī)構(gòu)
烈冰全線實(shí)驗(yàn)平臺滿足超深度,、大規(guī)模發(fā)現(xiàn)和復(fù)雜疾病研究的測序,。長沙10X Genomics單細(xì)胞測序服務(wù)機(jī)構(gòu)
所謂的高通量測序技術(shù),又名大規(guī)模平行測序,,是將 DNA(或者 cDNA)隨機(jī)片段化,、加接頭,制備測序文庫,,通過對文庫中數(shù)以萬計(jì)的克隆(colony)進(jìn)行延伸反應(yīng),,檢測對應(yīng)的信號,獲取序列信息,。與傳統(tǒng)測序法(Sanger法等)相比,,高通量測序技術(shù)在處理大規(guī)模樣品時(shí)具有明顯的優(yōu)勢,又快(兩天)又多(數(shù)百萬克?。?,成為目前組學(xué)研究的主要技術(shù)。單細(xì)胞測序是一個(gè)系統(tǒng)的工程,,開展項(xiàng)目前您可能會先評估它提供的見解是否與您的研究問題相匹配,,如果匹配,實(shí)驗(yàn)過程如何規(guī)劃,,實(shí)驗(yàn)平臺如何選擇,,樣本如何制備,數(shù)據(jù)如何分析等等,,而在這一切開始之前,,我們的服務(wù)就已經(jīng)開始了,從銷售到實(shí)驗(yàn)到專業(yè)技術(shù)支持,,我們開通全線對接渠道,,幫助您快速定位項(xiàng)目訴求,提供從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到文章發(fā)表的全流程,,我們始終是您貼心的科學(xué)合作伙伴,。長沙10X Genomics單細(xì)胞測序服務(wù)機(jī)構(gòu)
上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司是一家服務(wù)型類企業(yè),積極探索行業(yè)發(fā)展,,努力實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品創(chuàng)新,。公司致力于為客戶提供安全、質(zhì)量有保證的良好產(chǎn)品及服務(wù),是一家有限責(zé)任公司(自然)企業(yè),。公司業(yè)務(wù)涵蓋單細(xì)胞測序,,生物大數(shù)據(jù)云分析平臺,空間轉(zhuǎn)錄組測序,,單細(xì)胞多組學(xué)測序,,價(jià)格合理,品質(zhì)有保證,,深受廣大客戶的歡迎,。烈冰生物將以真誠的服務(wù)、創(chuàng)新的理念,、***的產(chǎn)品,,為彼此贏得全新的未來!