機(jī)體為響應(yīng)各種應(yīng)激,，其細(xì)胞會(huì)從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”；當(dāng)細(xì)胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時(shí),，往往會(huì)經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組,，導(dǎo)致一些基因被沉默，一些基因被重新“喚醒”,，但純化這些瞬態(tài)細(xì)胞進(jìn)行研究是很困難或不可能的,；scRNA-seq擬時(shí)序分析可以讓我們?cè)诓恍枰兓那闆r下查看這些細(xì)胞狀態(tài)。擬時(shí)序分析,，即根據(jù)不同細(xì)胞亞群基因表達(dá)量隨時(shí)間的變化情況,，構(gòu)建細(xì)胞譜系發(fā)育，但這里的時(shí)間并不是真時(shí)間,，而是一個(gè)虛擬的時(shí)間,，是指的細(xì)胞與細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡。即使在同一個(gè)樣本中,，也會(huì)存在多種不同的細(xì)胞形態(tài),。因此，不論測(cè)定了多少樣本,，我們都可以采用擬時(shí)序分析對(duì)樣本中的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和變化進(jìn)行描述,。烈冰生物成立于2010年，專(zhuān)注于單細(xì)胞測(cè)序領(lǐng)域科研服務(wù),。南昌10X單細(xì)胞測(cè)序

烈冰生物搭建近10臺(tái)10XGemomics平臺(tái),，目前為全國(guó)范圍內(nèi)的高校、醫(yī)院和研究所等單位的科研學(xué)者提供鼓舞,，10X微流體“雙十字”交叉系統(tǒng)為8或16通道系統(tǒng),，每個(gè)通道上限可捕獲20000細(xì)胞，16通道一次可檢測(cè)細(xì)胞范圍為百萬(wàn)級(jí)別的細(xì)胞水平,。此外,，單個(gè)細(xì)胞捕獲效率高達(dá)65%，可準(zhǔn)確鑒別稀有細(xì)胞類(lèi)型,，利于稀有樣本或小細(xì)胞量類(lèi)型樣本研究,；細(xì)胞可適性高,，對(duì)細(xì)胞大小（直徑超過(guò)40um細(xì)胞需要制備成細(xì)胞核）及類(lèi)型無(wú)限制,。細(xì)胞捕獲周期較短,，能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)分離，無(wú)需人工操作,，1天內(nèi)可完成從細(xì)胞懸液到cDNA文庫(kù)構(gòu)建的所有的測(cè)序準(zhǔn)備工作,。吉林10X Chromium X單細(xì)胞測(cè)序多組學(xué)測(cè)序烈冰測(cè)序服務(wù)已助力300余篇國(guó)際期刊研究文章發(fā)表。

RNA測(cè)序（RNA-seq）或芯片分析等大量樣本的轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法作為一類(lèi)強(qiáng)大的工具,，可提供混合樣本的基因表達(dá)平均數(shù)據(jù),，幫助科學(xué)家開(kāi)始揭示這種異質(zhì)性。隨后,，技術(shù)創(chuàng)新的飛躍在單細(xì)胞技術(shù)上達(dá)到新高度——使得科學(xué)家能夠定義細(xì)胞類(lèi)型特異的基因表達(dá),，從過(guò)去的平均數(shù)據(jù)中分辨出真正驅(qū)動(dòng)其表達(dá)模式的細(xì)胞異質(zhì)性。這讓研究人員能夠更詳細(xì)地表征組織異質(zhì)性,，鑒定稀有細(xì)胞類(lèi)型,，并逐個(gè)細(xì)胞地仔細(xì)分析其分子機(jī)制。當(dāng)獲得了對(duì)其研究的生物系統(tǒng)更為真實(shí)的圖譜后,，研究人員就有了更為堅(jiān)實(shí)可靠的知識(shí)基礎(chǔ),，并能在這個(gè)基礎(chǔ)上規(guī)劃下一步實(shí)驗(yàn)，以獲取更深入的可行動(dòng)見(jiàn)解,。

關(guān)于單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)樣本制備,，這與流式細(xì)胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致，也就是通過(guò)酶促或機(jī)械消化,、細(xì)胞分選或其他細(xì)胞分離技術(shù)從整個(gè)樣本中制備生成活的單細(xì)胞懸液,。隨后是細(xì)胞計(jì)數(shù)和質(zhì)量控制步驟，以確保您的樣本有適當(dāng)濃度的活細(xì)胞,，并且不含細(xì)胞團(tuán)塊和死細(xì)胞碎片,。如有必要，您還可以使用抗體對(duì)樣本進(jìn)行染色,，標(biāo)記細(xì)胞表面蛋白或其他生物分析物,，或者通過(guò)FACS來(lái)富集感興趣的細(xì)胞類(lèi)型。解離樣本時(shí)采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)而定,。也許需要額外的制備步驟,，具體取決于組織質(zhì)量、樣本豐度,、細(xì)胞大小,，以及是否需要提取出細(xì)胞核進(jìn)行染色質(zhì)可接近性分析。無(wú)論具體的考慮因素如何,，所有樣本類(lèi)型都遵循同一個(gè)基本原則,，那就是生成高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液,。全線搭建10X Genomics Chromium X單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)測(cè)序平臺(tái)。

針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞上樣數(shù),，為什么不建議捕獲到的細(xì)胞數(shù)量越高越好,？一味地追求高數(shù)量的細(xì)胞捕獲可能會(huì)存在一些問(wèn)題,。例如在上機(jī)細(xì)胞懸液濃度固定時(shí),，如果目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)增加到8000甚至10000，上樣細(xì)胞懸液體積勢(shì)必增加,，在細(xì)胞懸液質(zhì)量不是很理想（細(xì)胞活性<90%,、碎片率>5%、結(jié)團(tuán)率均>5%）的情況下,，引入的背景信號(hào)會(huì)增加,，分析結(jié)果不理想的直接體現(xiàn)包括：cell、non-cell無(wú)法有效區(qū)分和Fraction reads in cells偏低,。當(dāng)cell和non-cell無(wú)法有效區(qū)分時(shí),，會(huì)使得數(shù)據(jù)出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果！當(dāng)目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)很大時(shí),，多細(xì)胞率會(huì)增加,，數(shù)據(jù)分析時(shí)，此部分“cell”表現(xiàn)為基因檢測(cè)數(shù)和UMI檢測(cè)數(shù)是正常cell的N倍（N是一個(gè)GEM包裹的細(xì)胞數(shù)）,，導(dǎo)致所有細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)（單個(gè)細(xì)胞基因檢測(cè)中位數(shù),、單個(gè)細(xì)胞UMI檢測(cè)中位數(shù)）虛高。此部分“cell”雖然可以通過(guò)設(shè)置數(shù)據(jù)分析閾值進(jìn)行過(guò)濾,，但是容易會(huì)有此類(lèi)數(shù)據(jù)的殘留和正常高基因檢測(cè)細(xì)胞的人為去除,！單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài)，并鑒定細(xì)胞的類(lèi)型,。蘇州10X Chromium X單細(xì)胞測(cè)序多組學(xué)測(cè)序

烈冰引進(jìn)國(guó)際主流單細(xì)胞和空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序平臺(tái),，保障細(xì)胞精度的前提下提供組織內(nèi)部精細(xì)區(qū)域的空間信息。南昌10X單細(xì)胞測(cè)序

針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析時(shí)的reads數(shù),、基因表達(dá)量及細(xì)胞數(shù)量判定過(guò)程中：以捕獲5000個(gè)細(xì)胞,、100G的測(cè)序量為標(biāo)準(zhǔn)，每個(gè)細(xì)胞的reads數(shù)大約在50k左右,；每個(gè)細(xì)胞的基因中位數(shù)取決于樣本的細(xì)胞類(lèi)型,，例如成熟的B，T,，粒細(xì)胞數(shù)量較多的組織中,，由于該類(lèi)型細(xì)胞表達(dá)的基因數(shù)普遍較少，導(dǎo)致基因中位數(shù)下降,。而某些疾病組織,、或者體外培養(yǎng)的如干細(xì)胞等,，他們的基因表達(dá)數(shù)較高，甚至可以超過(guò)1W,，這就導(dǎo)致該類(lèi)樣本基因中位數(shù)非常高,。因此，我們對(duì)細(xì)胞數(shù)量以及基因中位數(shù)確認(rèn)時(shí),，需要考察實(shí)際組織的細(xì)胞組成,。南昌10X單細(xì)胞測(cè)序

上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司是一家生物科技、醫(yī)藥科技,、信息科技,、計(jì)算機(jī)科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)服務(wù),、技術(shù)轉(zhuǎn)讓,、技術(shù)咨詢，市場(chǎng)營(yíng)銷(xiāo)策劃,，市場(chǎng)信息咨詢與調(diào)查（不得從事社會(huì)調(diào)查,、社會(huì)調(diào)研、民意調(diào)查,、民意測(cè)驗(yàn)）,，從事貨物及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)，計(jì)算機(jī),、軟件及耗材（除專(zhuān)控）,，軟件開(kāi)發(fā)【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目，經(jīng)相關(guān)部門(mén)批準(zhǔn)后方可開(kāi)展經(jīng)營(yíng)活動(dòng)】的公司,，致力于發(fā)展為創(chuàng)新務(wù)實(shí),、誠(chéng)實(shí)可信的企業(yè)。烈冰生物深耕行業(yè)多年,，始終以客戶的需求為向?qū)?，為客戶提?**的單細(xì)胞測(cè)序，生物大數(shù)據(jù)云分析平臺(tái),，空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,，單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序。烈冰生物致力于把技術(shù)上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對(duì)用戶產(chǎn)品上的貼心,，為用戶帶來(lái)良好體驗(yàn),。烈冰生物始終關(guān)注自身，在風(fēng)云變化的時(shí)代,，對(duì)自身的建設(shè)毫不懈怠,，高度的專(zhuān)注與執(zhí)著使烈冰生物在行業(yè)的從容而自信。