基因和基因產(chǎn)物并不是單獨(dú)運(yùn)作的，而是參與了相互關(guān)聯(lián)的復(fù)雜通路,、網(wǎng)絡(luò)和分子系統(tǒng),，這些合在一起實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞、組織和生物體的運(yùn)作,。定義這些系統(tǒng)并確定它們的特征和相互作用,，對(duì)于了解生物系統(tǒng)如何運(yùn)作至關(guān)重要?！睘榱送苿?dòng)科學(xué)發(fā)現(xiàn),，科學(xué)家們需要各種能夠幫助多方位了解其樣本的潛在生物復(fù)雜性的研究工具。對(duì)于越來越多的研究人員來說,，單細(xì)胞RNA測(cè)序和單細(xì)胞多組學(xué)——即在單細(xì)胞分辨率下對(duì)基因表達(dá)及其他基于DNA,、RNA或蛋白質(zhì)的分析物進(jìn)行定量分析的基因組方法——在幫助解決他們面臨的生物學(xué)問題上已證實(shí)是行之有效的。烈冰專注單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序領(lǐng)域,。江蘇BD單細(xì)胞服務(wù)機(jī)構(gòu)

樣本制備后的保存 為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化,，在對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗和計(jì)數(shù)后，單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保存于冰上,，直至用于后續(xù)的上機(jī)和文庫制備步驟,。在理想狀況下，一旦制備好樣本,，應(yīng)當(dāng)在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟,。然而，您還有必要了解各類細(xì)胞的不同性質(zhì)，因?yàn)檫@可能會(huì)影響細(xì)胞應(yīng)在冰上保存的時(shí)間,，以及它們?cè)谥苽浜蠖嗑帽銘?yīng)當(dāng)被盡快使用,。例如，有些細(xì)胞（如PBMC）如果在冰上放置一段時(shí)間,，它們就開始形成團(tuán)塊,。這些團(tuán)塊很難解離，增加了堵塞的風(fēng)險(xiǎn),，而且每個(gè)團(tuán)塊被當(dāng)成單細(xì)胞計(jì)數(shù),，又降低了細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。此外,，有些細(xì)胞更加粘稠,，形成團(tuán)塊的速度更快。對(duì)于這些細(xì)胞,，必須盡量減少制備和使用之間的時(shí)間差,。蘇州BD Rhapsody單細(xì)胞平臺(tái)豐富的測(cè)序和數(shù)據(jù)分析經(jīng)驗(yàn)，烈冰配套全程個(gè)性化,、定制化地?cái)?shù)據(jù)分析服務(wù),。

單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)再樣本細(xì)胞上機(jī)分選簽，需要對(duì)細(xì)胞數(shù)量,、細(xì)胞活性進(jìn)準(zhǔn)判斷,，這對(duì)Single Cell分選標(biāo)記、建庫,、下機(jī)數(shù)據(jù)的質(zhì)量都具有著決定性的作用,。如若細(xì)胞計(jì)數(shù)偏高，將會(huì)影響建庫的成功率,；計(jì)數(shù)偏低,，則會(huì)提高雙細(xì)胞的比例；而細(xì)胞活率過低,，就會(huì)使測(cè)序數(shù)據(jù)的利用率大打折扣,，因此把好單細(xì)胞懸液質(zhì)量這一關(guān)尤為重要。而在鋪板過程中,，由于不同操作人員手法具有不可避免的差異,，不同的液體流速將直接影響單細(xì)胞的入孔效果。因此烈冰生物BD Rhapsody單細(xì)胞分選平臺(tái)配套了專門定制的電動(dòng)移液器,，其具有Prime Treat,、Cell Load、Bead Load,、Wash,、Lysis,、Retrieval多種操作模式，來對(duì)應(yīng)各種不同的操作,。通過已經(jīng)設(shè)定的程序來控制液體的流速,，大幅度降低人為操作習(xí)慣帶來的差異，保證實(shí)驗(yàn)操作的一致性,。

您的珍貴樣本,，還可以放心依賴烈冰生物BD Rhapsody單細(xì)胞捕獲系統(tǒng)，BD RhapsodyTM單細(xì)胞捕獲系統(tǒng)采用微孔技術(shù),，對(duì)細(xì)胞的捕獲沒有偏好性，實(shí)現(xiàn)高達(dá)80%的微孔板捕獲率,，由于單個(gè)微孔板中容納了22萬+個(gè)微孔,，而現(xiàn)階段單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)技術(shù)通常要求單個(gè)樣本捕獲3000-5000，至高達(dá)10000個(gè)細(xì)胞,，即可滿足科研探索需求,，因此這種“泊松分布”的原理類似于上樣細(xì)胞的無限稀釋過程，但22萬+微孔的存在,，也對(duì)大體量細(xì)胞數(shù)目的科學(xué)研究有很好的包容性,，細(xì)胞通量分為可擴(kuò)展至100-40000個(gè)細(xì)胞的捕獲（單個(gè)微孔板），滿足您的多重需求,。對(duì)于消化背景雜,，樣本初始數(shù)量少，關(guān)注粒細(xì)胞的項(xiàng)目,，推薦您使用烈冰BD 單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái),。

針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞上樣數(shù)，為什么不建議捕獲到的細(xì)胞數(shù)量越高越好,？一味地追求高數(shù)量的細(xì)胞捕獲可能會(huì)存在一些問題,。例如在上機(jī)細(xì)胞懸液濃度固定時(shí)，如果目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)增加到8000甚至10000,，上樣細(xì)胞懸液體積勢(shì)必增加,，在細(xì)胞懸液質(zhì)量不是很理想（細(xì)胞活性<90%、碎片率>5%,、結(jié)團(tuán)率均>5%）的情況下,，引入的背景信號(hào)會(huì)增加，分析結(jié)果不理想的直接體現(xiàn)包括：cell,、non-cell無法有效區(qū)分和Fraction reads in cells偏低,。當(dāng)cell和non-cell無法有效區(qū)分時(shí)，會(huì)使得數(shù)據(jù)出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果,！當(dāng)目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)很大時(shí),，多細(xì)胞率會(huì)增加,，數(shù)據(jù)分析時(shí)，此部分“cell”表現(xiàn)為基因檢測(cè)數(shù)和UMI檢測(cè)數(shù)是正常cell的N倍（N是一個(gè)GEM包裹的細(xì)胞數(shù)）,，導(dǎo)致所有細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)（單個(gè)細(xì)胞基因檢測(cè)中位數(shù),、單個(gè)細(xì)胞UMI檢測(cè)中位數(shù)）虛高。此部分“cell”雖然可以通過設(shè)置數(shù)據(jù)分析閾值進(jìn)行過濾,，但是容易會(huì)有此類數(shù)據(jù)的殘留和正常高基因檢測(cè)細(xì)胞的人為去除,！單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序可識(shí)別重要的轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)行譜系和發(fā)育追蹤,。廣州單細(xì)胞平臺(tái)

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科研的魅力之處，在于無窮盡的探尋生命的本底,，通過單細(xì)胞測(cè)序,，我們對(duì)組織的分子基礎(chǔ)的研究也從初級(jí)到深層，并在單細(xì)胞層面逐漸達(dá)成一致,，那么不禁要問一句,，組織的空間位置到底重不重要？空間異質(zhì)性是功能的關(guān)鍵特征,，細(xì)胞的位置信息更能反應(yīng)細(xì)胞命運(yùn)調(diào)控機(jī)制和細(xì)胞譜系發(fā)生過程,。因此時(shí)間和空間即像組織的AB面，而不可否認(rèn)的是,，此時(shí)空間坐標(biāo)的記錄,，像一個(gè)還未長(zhǎng)大的娃娃，雖未觸及分子基礎(chǔ)研究的深層,，但仍在努力攀登探尋生命本底的下一個(gè)高峰,。江蘇BD單細(xì)胞服務(wù)機(jī)構(gòu)

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