單細(xì)胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR（RT-qPCR）都采用一個共同過程,，即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析,。不過，每種分析在開展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同,。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA，然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA,。RNA-seq是使用cDNA來構(gòu)建新一代測序文庫,，從而測定整個轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá)。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點(diǎn),，并通過熒光測定表達(dá)水平,。RT-qPCR限于已知靶點(diǎn)，而RNA-seq可實(shí)現(xiàn)無偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析,。然而,，這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或單個微反應(yīng)容器中,。然后用細(xì)胞特異性的條形碼標(biāo)記RNA,，確保來自每個細(xì)胞的cDNA可以追溯到起源細(xì)胞。與RNA-seq相似,，帶有條形碼的cDNA也被用于構(gòu)建新一代測序文庫,，從而能夠?qū)γ總€細(xì)胞的整個轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行基因表達(dá)測定。從樣本處理到終端數(shù)據(jù)分析,，只要您需要,，烈冰提供全流程的無憂服務(wù)。蘇州高通量測序單細(xì)胞測序多組學(xué)測序

細(xì)胞中基因的表達(dá)是嚴(yán)格按照時(shí)間和空間順序發(fā)生,，因此細(xì)胞類型和基因表達(dá)具有時(shí)間特異性和空間特異性,。時(shí)間特異性可以通過收集不同時(shí)間點(diǎn)的樣本進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序來分析。但是單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序（scRNA-Seq）在單細(xì)胞懸液制備的過程中破壞了細(xì)胞的空間結(jié)構(gòu),，無法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息,。而空間轉(zhuǎn)錄組可以解決這個問題，其以點(diǎn)陣形式記錄組織切片細(xì)胞的空間信息,，在保留組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,，獲得細(xì)胞/基因的空間表達(dá)特異性。西安10X Chromium X單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析可視化單細(xì)胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破,。

現(xiàn)有的單細(xì)胞測序技術(shù)陣營在幾個主要領(lǐng)域存在差別,。一個是分隔單個細(xì)胞以在其中進(jìn)行微反應(yīng)的物理平臺。在這個空間,，單個細(xì)胞的內(nèi)容物釋放,，轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標(biāo)記或添加索引，以便下游識別。現(xiàn)有技術(shù)的另一個主要區(qū)別是如何添加索引,，就像生成測序文庫所涉及的流程步驟一樣,。10XGenomics單細(xì)胞測序平臺采用動態(tài)微流控技（Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理）。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,，其中一列縱向孔道輸入細(xì)胞,，凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上，并通過微流控技術(shù),，將之輸入到第二縱向孔道,，即油相孔道中。這時(shí)候,，就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細(xì)胞以及一個凝膠微珠,，那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的CellBarcode和UMIBarcode連接形成的序列,，再加上一端PolyT的抓手，構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠,。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligodT抓住mRNA構(gòu)建文庫,。

針對單細(xì)胞測序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié)：主要是對細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量,、測序質(zhì)量進(jìn)行整體描述,。過濾標(biāo)準(zhǔn)：由于細(xì)胞破碎后游離RNA會釋放到環(huán)境或孔中，并且測序中也會存在一些死細(xì)胞,，導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在background值,。因此，我們需要設(shè)定一定的標(biāo)準(zhǔn)來過濾掉假細(xì)胞或死細(xì)胞,。以10×Genomics為例,，細(xì)胞數(shù)量判斷主要通過分析UMICounts-Barcode曲線斜率拐點(diǎn)，當(dāng)存在多個斜率拐點(diǎn)的時(shí)候,，結(jié)合預(yù)期UMI=500時(shí)的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行過濾,。當(dāng)斜率拐點(diǎn)低于UMI=500的時(shí)候，選擇UMI=500作為細(xì)胞的判斷的標(biāo)準(zhǔn),；否則,，選擇和預(yù)期細(xì)胞數(shù)量接近的拐點(diǎn)作為細(xì)胞判斷的位置。這樣我們能夠有效獲得真實(shí)的并且在基因數(shù)量上可以分析的數(shù)據(jù),。過去的十年,，我們是知識的承載者；現(xiàn)在,，我們在努力構(gòu)建醫(yī)學(xué)的大數(shù)據(jù)時(shí)代,；未來我們將重新定義知識形態(tài)！

烈冰與國內(nèi)高校、研究所,、醫(yī)院和藥企單位開展深度合作,，服務(wù)于600+臨床與研究機(jī)構(gòu)，1000+客戶和5000+重要科研項(xiàng)目,，助力并聯(lián)合發(fā)表300+篇CNS等國際學(xué)術(shù)期刊（不完全統(tǒng)計(jì)）,，在單細(xì)胞領(lǐng)域，烈冰助力用戶發(fā)表單細(xì)胞文獻(xiàn)30+篇,，總IF＞300+,，IF＞10+以上文章占比65%以上，包含Immunity,、NatureCellBiology,、NaturePlants、AdvancedScience等生物領(lǐng)域國際主流學(xué)術(shù)期刊,，已發(fā)表文章研究領(lǐng)域涵蓋包括COVID-19研究,、疾病發(fā)生轉(zhuǎn)移機(jī)制，免疫研究,、腦神經(jīng),、白血病、胚胎發(fā)育,、糖尿病,、退行性疾病和植物領(lǐng)域研究等。截至2021年10月,，烈冰助力發(fā)表單細(xì)胞測序文章近20篇,。溫州上海烈冰單細(xì)胞測序

個性化制定測序項(xiàng)目方面，滿足從檢測基因到蛋白的多組學(xué)測序要求,。蘇州高通量測序單細(xì)胞測序多組學(xué)測序

基因和基因產(chǎn)物并不是單獨(dú)運(yùn)作的,，而是參與了相互關(guān)聯(lián)的復(fù)雜通路、網(wǎng)絡(luò)和分子系統(tǒng),，這些合在一起實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞,、組織和生物體的運(yùn)作。定義這些系統(tǒng)并確定它們的特征和相互作用,，對于了解生物系統(tǒng)如何運(yùn)作至關(guān)重要,。”為了推動科學(xué)發(fā)現(xiàn),，科學(xué)家們需要各種能夠幫助多方位了解其樣本的潛在生物復(fù)雜性的研究工具,。對于越來越多的研究人員來說，單細(xì)胞RNA測序和單細(xì)胞多組學(xué)——即在單細(xì)胞分辨率下對基因表達(dá)及其他基于DNA,、RNA或蛋白質(zhì)的分析物進(jìn)行定量分析的基因組方法——在幫助解決他們面臨的生物學(xué)問題上已證實(shí)是行之有效的,。蘇州高通量測序單細(xì)胞測序多組學(xué)測序

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