二代測序技術(shù)在測序方法上取得了重大突破,，基于“邊合成邊測序”（sequencingbysynthesis）和大規(guī)模平行測序技術(shù)（massiveparallelanalysis,MPS），使測序通量和讀取速度得到極大提升,，例如IlluminaSolexa測序儀,。Illumina的測序原理可以簡化為四步：樣品文庫構(gòu)建、簇生成,、測序和數(shù)據(jù)分析,。由于讀長限制，樣品DNA或由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段,，并在3和5端接上3種序列：1）Index,，用于區(qū)分樣品來源；2）Adapter,，用于結(jié)合測序通道上的位點(diǎn),；3）Primerbindingsite，用于結(jié)合PCR引物啟動(dòng)擴(kuò)增反應(yīng),。

全線搭建10x Genomics單細(xì)胞測序平臺(tái),。長沙二代測序單細(xì)胞測序平臺(tái)

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序是在單細(xì)胞水平上高通量測序分析基因表達(dá)譜的技術(shù)，突破傳統(tǒng)高通量測序的局限性,，組織解離后，單個(gè)樣本一次上機(jī)能捕獲500-20000個(gè)細(xì)胞,，基于每個(gè)細(xì)胞分別建庫測序,，獲得單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài)，并鑒定細(xì)胞的類型,，可以在不同樣本間從細(xì)胞類型的組成和豐度角度進(jìn)行比較,，反映細(xì)胞間的異質(zhì)性。而2021年橫空出世的10XGenomicsChromiumX平臺(tái)實(shí)現(xiàn)了單塊chip上的百萬級(jí)別通量的細(xì)胞捕獲,，系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)16個(gè)通道同時(shí)運(yùn)行,，每個(gè)通道可捕獲2000-20000個(gè)細(xì)胞（不混樣），并支持原ChromiumController體統(tǒng)外的多種細(xì)胞捕獲百萬級(jí)別通量實(shí)驗(yàn),，可準(zhǔn)確鑒別稀有細(xì)胞類型和適配大規(guī)模單細(xì)胞研究,。長沙二代測序單細(xì)胞測序平臺(tái)烈冰生物為您提供多平臺(tái)一站式全流程單細(xì)胞測序服務(wù)。

烈冰生物搭建近10臺(tái)10XGemomics平臺(tái),，目前為全國范圍內(nèi)的高校,、醫(yī)院和研究所等單位的科研學(xué)者提供鼓舞，10X微流體“雙十字”交叉系統(tǒng)為8或16通道系統(tǒng)，每個(gè)通道上限可捕獲20000細(xì)胞,，16通道一次可檢測細(xì)胞范圍為百萬級(jí)別的細(xì)胞水平,。此外,，單個(gè)細(xì)胞捕獲效率高達(dá)65%，可準(zhǔn)確鑒別稀有細(xì)胞類型,，利于稀有樣本或小細(xì)胞量類型樣本研究；細(xì)胞可適性高,，對(duì)細(xì)胞大小（直徑超過40um細(xì)胞需要制備成細(xì)胞核）及類型無限制,。細(xì)胞捕獲周期較短,，能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)分離，無需人工操作,，1天內(nèi)可完成從細(xì)胞懸液到cDNA文庫構(gòu)建的所有的測序準(zhǔn)備工作。

FluidigmC1平臺(tái)作為應(yīng)用于單細(xì)胞測序（SingleCellRNASequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化分選技術(shù),，基于富魯達(dá)（Fluidigm®）的微流控技術(shù),，大約在幾個(gè)小時(shí)中可以捕獲96個(gè)左右的細(xì)胞，進(jìn)行各類的Single-Cell測序建庫,。當(dāng)然,，通量還是比較小。但不可否認(rèn)的是,，現(xiàn)在很多非RNA類SingleCell測序,，仍然在采用這樣的技術(shù)，如SingleCellDNA-Seq,，SingleCellATAC-Seq等,，都是采用此技術(shù)進(jìn)行單細(xì)胞分選后再分別用不同試劑盒建庫。所以可以說,，至少在10X和BD,，或者其他企業(yè)推出有效的SingleDNA測序技術(shù)之前，C1仍然會(huì)是市場上的重要組成部分,。測序可準(zhǔn)確地分析基因表達(dá)差異,、基因結(jié)構(gòu)變異,、篩選分子標(biāo)記（SNPs或SSR）等生命科學(xué)重要問題,。

單細(xì)胞測序結(jié)果動(dòng)輒上百G數(shù)據(jù)量，龐大的數(shù)據(jù)對(duì)于分析平臺(tái)和分析能力有著很高的要求，首先針對(duì)下機(jī)數(shù)據(jù)的質(zhì)控環(huán)節(jié)：單細(xì)胞測序產(chǎn)生數(shù)億的結(jié)果序列,，不可避免的會(huì)出現(xiàn)低質(zhì)量的測序結(jié)果,，存在各種情況的序列污染。因此序列過濾及質(zhì)量評(píng)估就會(huì)變得極為重要,。序列質(zhì)量主要通過測序質(zhì)量值Q20/Q30的占比來表征,，即堿基測序結(jié)果的錯(cuò)誤率在1%/0.1%以下的比例。理想的測序結(jié)果reads的堿基質(zhì)量均高于30,。保證數(shù)據(jù)獲得后的處理結(jié)果的準(zhǔn)確性,，為后續(xù)細(xì)胞類型鑒定和功能分析打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。ATCG堿基的排列組合構(gòu)成了測序的龐大世界,。西安二代測序單細(xì)胞測序商業(yè)化服務(wù)

截至2021年10月,，烈冰助力發(fā)表單細(xì)胞測序文章近20篇。長沙二代測序單細(xì)胞測序平臺(tái)

針對(duì)樣本活性的問題,，10×Genomics官方建議當(dāng)單細(xì)胞懸液活性低于70%時(shí)應(yīng)做去除死細(xì)胞操作,，但也需要注意到，去除死細(xì)胞的操作會(huì)損失一定的細(xì)胞數(shù)量,，10×Genomics和MiltenyiBiotec都沒有給出單細(xì)胞懸液含有多少細(xì)胞數(shù)量才建議做去除死細(xì)胞的操作,。基于烈冰多年單細(xì)胞測序?qū)嶒?yàn)經(jīng)驗(yàn),，建議當(dāng)細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)量和活性檢測后,，考慮對(duì)細(xì)胞活性在50%-70%的懸液進(jìn)行去除死細(xì)胞的操作。而太低活性的懸液（小于30%）,，懸液中細(xì)胞大量死亡,，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細(xì)胞比例和狀態(tài)，失真嚴(yán)重,，建議重新收集樣本進(jìn)行新的實(shí)驗(yàn),，保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。長沙二代測序單細(xì)胞測序平臺(tái)

上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司屬于醫(yī)藥健康的高新企業(yè),，技術(shù)力量雄厚,。公司致力于為客戶提供安全、質(zhì)量有保證的良好產(chǎn)品及服務(wù),，是一家有限責(zé)任公司（自然）企業(yè),。公司始終堅(jiān)持客戶需求優(yōu)先的原則，致力于提供高質(zhì)量的單細(xì)胞測序,，生物大數(shù)據(jù)云分析平臺(tái),，空間轉(zhuǎn)錄組測序，單細(xì)胞多組學(xué)測序,。烈冰生物自成立以來,，一直堅(jiān)持走正規(guī)化,、專業(yè)化路線，得到了廣大客戶及社會(huì)各界的普遍認(rèn)可與大力支持,。