10X Genomics單細胞轉(zhuǎn)錄組測序是利用單細胞水平上的高通量測序分析基因表達譜的技術(shù),，也是目前國內(nèi)和國際上公認的單細胞測序大規(guī)模實驗平臺技術(shù),，該平臺基于動態(tài)微流控原理,，突破傳統(tǒng)高通量測序的局限性,，組織解離后，單個樣本一次上機能捕獲500-20000個細胞,， 基于每個細胞分別建庫測序,，獲得單個細胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達狀態(tài),，并鑒定細胞的類型,，可以在不同樣本間從細胞類型的組成和豐度角度進行比較,，反映細胞間的異質(zhì)性，提供足夠靈活的定制測定法以滿足多種實驗需要,，并有效縮短實驗是時間和降低測序成本,。助力探索生命時空多維度的動態(tài)變化的生物學信息；助力醫(yī)療健康時代,！武漢10X單細胞測序數(shù)據(jù)分析可視化

關(guān)于單細胞測序?qū)嶒灅颖局苽?，這與流式細胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致，也就是通過酶促或機械消化,、細胞分選或其他細胞分離技術(shù)從整個樣本中制備生成活的單細胞懸液。隨后是細胞計數(shù)和質(zhì)量控制步驟,，以確保您的樣本有適當濃度的活細胞,，并且不含細胞團塊和死細胞碎片。如有必要,，您還可以使用抗體對樣本進行染色,，標記細胞表面蛋白或其他生物分析物，或者通過FACS來富集感興趣的細胞類型,。解離樣本時采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實驗目標而定,。也許需要額外的制備步驟，具體取決于組織質(zhì)量,、樣本豐度,、細胞大小，以及是否需要提取出細胞核進行染色質(zhì)可接近性分析,。無論具體的考慮因素如何,，所有樣本類型都遵循同一個基本原則,，那就是生成高質(zhì)量的單細胞懸液。成都10X單細胞測序多組學測序從樣本處理到終端數(shù)據(jù)分析,，只要您需要,，烈冰提供全流程的無憂服務。

烈冰生信團隊傾情研發(fā)的NovelBrain®生信大數(shù)據(jù)分析平臺,，針對龐大的單細胞測序數(shù)據(jù),，能夠?qū)崿F(xiàn)細胞類型鑒定的快、精,、準：一鍵導入genelist構(gòu)建個性化基因列表,；輕松一點即可展示Marker基因的Featureplot；任意修改Cluster的顏色和名稱助力高效鑒定細胞類型,；一鍵獲得t-SNE圖,、Heatmap和Violin圖：輕松獲得并下載基因表達的t-SNE圖、Heatmap,、Violin圖,，還可以通過調(diào)節(jié)寬、高和系數(shù)比例來調(diào)節(jié)美觀,。平臺上線300+task自主分析工具,、50+pipeline工作流模板，幫助烈冰生信分析團隊和自主分析用戶實現(xiàn)分析工具和模板的快速調(diào)用和一站式全流程自動化分析,，節(jié)省工作時間并提升整體工作效率

細胞計數(shù)和活力評估在評估樣本質(zhì)量時,，需要在細胞清洗和過濾之后測定細胞活力，這一點至關(guān)重要,。測定細胞活力有許多種方法,，烈冰多年單細胞測序經(jīng)驗發(fā)現(xiàn)臺盼藍法在鑒定活細胞與死細胞的比例時效果很好。細胞計數(shù)的準確性以及目標回收量和實際回收量之間的一致性,，取決于我們了解樣本中有多少個細胞,。一旦過濾和清洗完成，可采用細胞計數(shù)設備（如血球計數(shù)器或自動細胞計數(shù)儀）進行定量,。這些設備不但能提供準確的細胞計數(shù),，還能計算出向微流體芯片上樣適量細胞所需的細胞懸液體積。高通量測序技術(shù)是對傳統(tǒng)測序一次突破性的改變,，一次對幾十萬到幾百萬條核酸序列進行測定,。

10XGenomics是一種基于drop的微流控技術(shù)，液體在配套芯片中的微管道中流動,，因此細胞直徑會受到芯片中微管道直徑的限制,，微流體通道的直徑約為50~60um，因此捕獲細胞的直徑不能超過40um,。當細胞直徑過大時,，容易出現(xiàn)管道堵塞,，造成GEM生成失敗，對于神經(jīng)科學研究和心血管疾病研究的老師而言,，準備采用單細胞技術(shù)用于課題研究的時候,，往往會遇到一個尷尬的問題，就是目標細胞,，例如神經(jīng)元細胞,、成熟心肌細胞由于體積過大，不適用于10X單細胞技術(shù),。其中神經(jīng)元細胞的直徑很大,，直接超過了芯片中管道的直徑，雖然心肌細胞直徑低于50um,，但是成熟心肌細胞的長度很長,，有可能堵塞通道造成實驗失敗，這也是為什么現(xiàn)在很多已發(fā)表的心臟單細胞文章,，主要研究方向是心臟發(fā)育的原因了,，主要還是因為未發(fā)育成熟的心肌細胞比較小，不會出現(xiàn)堵塞管道的風險,。因此可以考慮組織解離后過40um濾網(wǎng),，過濾掉大細胞，避免出現(xiàn)管道堵塞,、實驗失敗的風險,。此種方案的缺點是大細胞被過濾掉，丟失相關(guān)細胞數(shù)據(jù),；另外組織解離獲得高質(zhì)量細胞懸液以后,，繼續(xù)做細胞裂解抽細胞核，開展細胞核測序,。具體可訪問烈冰官網(wǎng)給我們留言,，烈小冰將安排專業(yè)技術(shù)為您詳細解答。過去的十年,，我們是知識的承載者；現(xiàn)在,，我們在努力構(gòu)建醫(yī)學的大數(shù)據(jù)時代,；未來我們將重新定義知識形態(tài)！武漢10X單細胞測序數(shù)據(jù)分析可視化

烈冰測序服務已助力300余篇國際期刊研究文章發(fā)表,。武漢10X單細胞測序數(shù)據(jù)分析可視化

烈冰生物搭建近10臺10XGemomics平臺,，目前為全國范圍內(nèi)的高校、醫(yī)院和研究所等單位的科研學者提供鼓舞,，10X微流體“雙十字”交叉系統(tǒng)為8或16通道系統(tǒng),，每個通道上限可捕獲20000細胞,，16通道一次可檢測細胞范圍為百萬級別的細胞水平。此外,，單個細胞捕獲效率高達65%,，可準確鑒別稀有細胞類型，利于稀有樣本或小細胞量類型樣本研究,；細胞可適性高,，對細胞大小（直徑超過40um細胞需要制備成細胞核）及類型無限制,。細胞捕獲周期較短,，能夠?qū)崿F(xiàn)自動分離，無需人工操作,，1天內(nèi)可完成從細胞懸液到cDNA文庫構(gòu)建的所有的測序準備工作,。武漢10X單細胞測序數(shù)據(jù)分析可視化

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