亞硫酸鹽結(jié)合測序是DNA甲基化檢測的“金標準”方案,。除了全基因組甲基化測序等研究手段，對于目標基因/位點檢測或者轉(zhuǎn)化醫(yī)學應(yīng)用研究來說,，需要靈活的靶向甲基化測序方案,。BSP(BisulfiteSequencingPCR)結(jié)合高通量測序的TargetBisulfiteSequencing滿足幾個到上百個基因/位點的驗證需求,具有高通量,、低成本的優(yōu)勢,***用于臨床大樣本多位點的甲基化biomarker篩選及高水平文章甲基化驗證環(huán)節(jié)。微生物定植對腸道免疫和代謝相關(guān)基因DNA甲基化的影響——團隊成員發(fā)表.(IF=)我們以早產(chǎn)幼豬為模型,，利用RRBS測序比較正常(n=7)和口服***(n=7)的腸道DNA甲基化差異,，發(fā)現(xiàn)與先天免疫應(yīng)答、吞噬和代謝等相關(guān)基因的DNA甲基化和表達存在***的差異,，并通過高通量BSP測序?qū)GFL7,、LBP8、PTPRE差異甲基化基因進行了驗證,。 TBS具有高深度,、定量、高準確性 ,。重慶焦磷酸測序技術(shù)服務(wù)方案

DNA甲基化對基因表達調(diào)控起著動態(tài)的重要作用,。 借助MethylationEPIC BeadChip，研究人員可以基于單核苷酸分辨率定量檢測基因組中的850,000多個甲基化位點,。包括FFPE在內(nèi)的多重樣本可以并行分析,，以便在每樣本比較低成本的情況下實現(xiàn)高通量功能。依托業(yè)界**的Infinium實驗分析方法,，MethylationEPIC BeadChip是全表觀基因組關(guān)聯(lián)研究(EWAS)的理想之選,。它提供了由**精選的***的覆蓋范圍，囊括99%的RefSeq基因,，95%的CpG島，高覆蓋度的增強子區(qū)域和其他內(nèi)容類別,。由于超過90%的Infinium HumanMethylation450K位點內(nèi)容都涵蓋在內(nèi),，因此新一代MethylationEPIC試劑盒對這些位點也完全支持。重慶6mA技術(shù)服務(wù)專業(yè)服務(wù)中小樣本篩選, 大樣本中進一步驗證,。

技術(shù)優(yōu)勢

1,、ChIP-Seq 能實現(xiàn)真正的全基因組分析。目前所能獲得的芯片上固定的探針只能**全基因組部分序列,，所獲得的雜交信息具有偏向性,。

2、對于結(jié)合位點分析,，ChIP-Seq 通過尋找“峰”,，結(jié)合分辨率可精確到10~30 bp，而芯片上探針由于長度所限,，無法精確定位,，即使目前比較高水平的商業(yè)芯片都無法提供可與ChIP-Seq 媲美的分辨率。

3,、是所需樣本數(shù)量,。ChIP-chip 需要多達4~5 μg?的起始樣本,，在雜交之前需要進行LM-PCR，但可能導致背景增高,，競爭性擴增等導致假陽性,。而ChIP-Seq *需要納克級起始材料，如SOLiD 起始材料可低至20ng,。

    cfDNA,，cellfreeDNA，就是血液中游離的自身DNA,，這些DNA多是從身體的細胞或者白血球破裂釋放出來的,，基本上都是無害的，不用多久會被自身清理掉,。不過值得一提的是,，當孕婦懷孕的時候，胎兒的DNA也會同時釋放到母親的血液里頭去,，這是當前火熱的無創(chuàng)唐氏篩查的基礎(chǔ),。通過抽取母親的外周血測序分析其中的游離DNA就可以判斷胎兒是否存在整個染色體或者大片段DNA的變異。有研究已經(jīng)證實,，**患者外周血中的cfDNA總量,，要高于健康人。通過這一點,，雖然不能武斷的說cfDNA能成為**標志物,，但是cfDNA的含量增多，能起到一個較好的提示作用,，作為一個初篩的手段,。基于cfDNA的液態(tài)活檢中,，盡管ctDNA在**診斷中的應(yīng)用是當下cfDNA*****,，研究**深入的分支。但是,，cfDNA作為液態(tài)活檢,，不只是局限于**學。例如,，有研究報道對于接受***移植手術(shù)的病人,，可以通過監(jiān)測術(shù)后外周血中具有捐獻者基因特征，片段化的cfDNA含量變化,，來評估移植***的排斥情況,。 通過甲基化數(shù)據(jù)與耐藥基因Panel數(shù)據(jù)聯(lián)合分析。

    甲基化是表觀修飾的重要部分，DNA甲基化可以引起DNA構(gòu)象,、穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,，從而影響基因表達。DNA鏈中含有很多CpG結(jié)構(gòu),，雙鏈DNACpG中的胞嘧啶五位碳原子通常容易被甲基化,，基因組中60~90%的CpG都被甲基化，未甲基化的CpG成簇出現(xiàn)在基因啟動子**序列或者轉(zhuǎn)錄起始位點,。DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶可以催化CpG的甲基化反應(yīng),。DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶有兩種，Dnmt1是一種持續(xù)性甲基化轉(zhuǎn)移酶,，作用于只有一條鏈甲基化的DNA雙鏈,，使其完全甲基化，參與DNA復制過程中新合成鏈的甲基化修飾,；Dnmt3a/Dnmt3b是一種從頭甲基化轉(zhuǎn)移酶,，可以在CpG上產(chǎn)生新的甲基化修飾，首先半甲基化,，繼而全甲基化,，該甲基化轉(zhuǎn)移酶可能參與細胞生長分化的調(diào)控，在**基因甲基化中起到重要作用,。近年來CRISPR/Cas9技術(shù)得到快速發(fā)展,，在基因切割活性失活的dCas9的5’端融合一個Dnmt3a，能夠通過dCas9介導特定位點的甲基化修飾,，調(diào)控相關(guān)基因的表達,。 WGBS技術(shù)及應(yīng)用是有力方案。上海RRBS技術(shù)服務(wù)活動

DNA異常甲基化與疾病的發(fā)生,、發(fā)展有著密切的聯(lián)系,。重慶焦磷酸測序技術(shù)服務(wù)方案

DNA甲基化作為表觀遺傳學研究的重要范疇，已經(jīng)越來越受到研究者的關(guān)注,。近些年來，隨著DNA甲基化與組蛋白甲基化的聯(lián)合作用機制,、RNA干擾機制及去甲基化機制的發(fā)現(xiàn),，使得DNA甲基化研究受到***關(guān)注，從醫(yī)學領(lǐng)域擴展到動植物研究當中,，同時在研究方法上也取得了很大的突破?，F(xiàn)在用于DNA甲基化檢測的方法大概有十多種，從應(yīng)用上來分,，大致可以分成兩類：全基因組甲基化分析及特異位點甲基化檢測,。下面，我們就這兩大類檢測技術(shù)進行分析比較,，以便于在實際的科研工作中進行選擇,。重慶焦磷酸測序技術(shù)服務(wù)方案