液滴數(shù)字PCR源于乳液PCR( emulsion PCR) 技術，即將DNA模板與連接引物的磁性微球以極低的濃度(比如單拷貝) 包裹于油水兩相形成的納升至皮升級液滴中進行 PCR 擴增,，擴增后的產(chǎn)物富集在磁性微球上,，收集破乳后進行測序,。通過油水兩相間隔得到的以液滴為單位的 PCR 反應體系，比微孔板和 IFC 系統(tǒng)更容易實現(xiàn)小體積和高通量,，而且系統(tǒng)簡單,，成本低，因此成為理想的數(shù)字PCR技術平臺,。Vogelstein 及其同事提出的 BEAMing 技術就是一種基于乳液PCR的數(shù)字PCR系統(tǒng),。Lu 等也采用 BEAMing 和連接酶反應實現(xiàn)對 mRNA 的定量分析。Zhou 等在 BEAMing PCR 擴增后破乳,，將連接不同產(chǎn)物的磁珠包被在聚丙烯酰胺凝膠中制成磁珠陣列進行熒光檢測,。目前有超過130萬條經(jīng)鎖核酸修飾的引物，提供至少3種設計方案以滿足不同跨外顯子區(qū)域的檢測需求,。四川數(shù)字PCR方案

常規(guī)PCR和實時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數(shù)的標準DNA制定標準曲線,，由于樣品測定在各種條件上不會完全一致，會造成PCR擴增效率的差異,，從而影響定量結(jié)果的準確性,。而ddPCR不受標準曲線和擴增動力學影響，可以進行***定量。dPCR也有一些缺點,，數(shù)字PCR系統(tǒng)成本高,，通量有限、操作繁瑣等不足,。芯片式dPCR由于芯片加工成本高,，系統(tǒng)復雜度高，使得商業(yè)化優(yōu)勢不是特別明顯,，特別是目前大多數(shù)分子診斷qPCR也能夠很好的滿足需求,，dPCR增加的收益成本比并不算高。液滴式相對芯片式成本有所下降,，但典型的液滴式dPCR液滴形成和PCR擴增和檢測都分別在不同儀器中完成,，增加了很多操作，也增加了系統(tǒng)的復雜性,，從這點上看全自動熒光定量PCR做的更好,。四川Digital PCR數(shù)字PCR售后分析可以用來驗證二代測序(NGS)。

1999年,，Bert Vogelstein創(chuàng)造了“數(shù)字PCR”一詞,，文章正式報道于美國科學院院刊PNAS，并表明該技術可用于發(fā)現(xiàn)罕見的**突變,。作者是美國**研究者,、霍華德·休斯醫(yī)學研究所研究員貝爾特·福格爾斯泰因（Bert Vogelstein）。目前dPCR主要有兩種形式,，芯片式和液滴式,，但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中，每個反應器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個,。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,，有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號，沒有模板的反應器就沒有熒光信號,。根據(jù)相對比例和反應器的體積,，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。

20 世紀末,，Vogelstein等提出數(shù)字PCR(digital PCR,，dPCR) 的概念，通過將一個樣本分成幾十到幾萬份,，分配到不同的反應單元,，每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子( DNA 模板) ，在每個反應單元中分別對目標分子進行PCR擴增,，擴增結(jié)束后對各個反應單元的熒光信號進行統(tǒng)計學分析,。與 qPCR 不同的是，數(shù)字PCR不依賴于CT值，因此不受擴增效率影響,，擴增結(jié)束后通過直接計數(shù)或泊松分布公式來計算每個反應單元的平均濃度(含量),，能夠?qū)⒄`差控制在5%以內(nèi)，數(shù)字PCR 可以不需要對照標準樣品和標準曲線來實現(xiàn)***定量分析,。德立替尼***HR+/HER2-轉(zhuǎn)移性乳腺*,。

數(shù)字PCR（Digital PCR-dPCR）技術是一種新的核酸檢測和定量方法，與傳統(tǒng)定量PCR（qPCR）技術不同,，數(shù)字PCR采用***定量的方式,，不依賴于標準曲線和參照樣本，直接檢測目標序列的拷貝數(shù),。由于這種檢測方式具有比傳統(tǒng)qPCR更加出色的靈敏度和特異性,、精確性，dPCR迅速得到***的應用,，這項技術在極微量核酸樣本檢測、復雜背景下稀有突變檢測和表達量微小差異鑒定方面變現(xiàn)出的優(yōu)勢已被普遍認可,，而其在基因表達研究,、microRNA研究、基因組拷貝數(shù)鑒定,、**標志物稀有突變檢測,、致病微生物鑒定、轉(zhuǎn)基因成分鑒定,、NGS測序文庫精確定量和結(jié)果驗證等諸多方面具有的廣闊應用前景已經(jīng)受到越來越多的關注,。數(shù)字PCR可以用來研究基因表達。上海準確數(shù)字PCR服務

可以用于白血病融合基因檢測,。四川數(shù)字PCR方案

使用不合適的引物可能會引入引物二聚體,、非特異性擴增等，進而影響實驗結(jié)果的準確性,。在此,，小Q建議您在設計引物時需做以下幾個方面的檢查，***需對設計好的引物進行BLAST比對分析,，以確保引物的特異性,！在數(shù)字PCR***定量實驗中，對于基因突變檢測,、基因表達差異分析和拷貝數(shù)變異鑒定等對實驗精細性要求較高的實驗,，需要特異性更高的Assay。QIAGEN基于QIAcuity數(shù)字PCR平臺開發(fā)并驗證了針對上述常見應用的700多組dPCR LNA Assay,，所有Assay均經(jīng)過鎖核酸修飾來增強其對互補序列的親和力和特異性,，進而提高實驗結(jié)果的準確性。四川數(shù)字PCR方案