數(shù)字PCR（Digital PCR-dPCR）技術(shù)是一種新的核酸檢測和定量方法，與傳統(tǒng)定量PCR（qPCR）技術(shù)不同,，數(shù)字PCR采用***定量的方式,，不依賴于標(biāo)準(zhǔn)曲線和參照樣本，直接檢測目標(biāo)序列的拷貝數(shù),。由于這種檢測方式具有比傳統(tǒng)qPCR更加出色的靈敏度和特異性,、精確性，dPCR迅速得到***的應(yīng)用,，這項技術(shù)在極微量核酸樣本檢測,、復(fù)雜背景下稀有突變檢測和表達(dá)量微小差異鑒定方面變現(xiàn)出的優(yōu)勢已被普遍認(rèn)可，而其在基因表達(dá)研究,、microRNA研究,、基因組拷貝數(shù)鑒定、**標(biāo)志物稀有突變檢測,、致病微生物鑒定,、轉(zhuǎn)基因成分鑒定、NGS測序文庫精確定量和結(jié)果驗證等諸多方面具有的廣闊應(yīng)用前景已經(jīng)受到越來越多的關(guān)注,。微反應(yīng)單元體積大小一致且穩(wěn)定是泊松分布準(zhǔn)確計算的前提,。廣東Digital PCR數(shù)字PCR方案

20 世紀(jì)末，Vogelstein等提出數(shù)字PCR(digital PCR,，dPCR) 的概念,，通過將一個樣本分成幾十到幾萬份，分配到不同的反應(yīng)單元,，每個單元包含一個或多個拷貝的目標(biāo)分子( DNA 模板) ，在每個反應(yīng)單元中分別對目標(biāo)分子進(jìn)行PCR擴增,，擴增結(jié)束后對各個反應(yīng)單元的熒光信號進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,。與 qPCR 不同的是，數(shù)字PCR不依賴于CT值,，因此不受擴增效率影響,，擴增結(jié)束后通過直接計數(shù)或泊松分布公式來計算每個反應(yīng)單元的平均濃度(含量)，能夠?qū)⒄`差控制在5%以內(nèi),，數(shù)字PCR 可以不需要對照標(biāo)準(zhǔn)樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線來實現(xiàn)***定量分析,。廣東PCR數(shù)字PCR口碑推薦用數(shù)字化PCR是非常不錯的一個選擇，而且也非常便宜,。

（5）在SARS-CoV-2核酸參考品制備中,，數(shù)字PCR能夠?qū)怂徇M(jìn)行精確的定量,，能夠提高世界各國SARS-CoV-2核酸測量結(jié)果的一致性和準(zhǔn)確性。（6）數(shù)字PCR能夠靈敏檢測與定量環(huán)境中的病毒RNA濃度,，包括從不同環(huán)境中取樣的樣本（如公共區(qū)域,、病房、醫(yī)院衛(wèi)生間,、實驗室操作員手套,、廢水等等）。（7）在實驗室樣品與臨床樣品病毒突變檢測中,，數(shù)字PCR適合用于已知的SARS-CoV-2遺傳變異檢測,，特別是對于一些低頻突變。（8）在抗病毒藥物的研發(fā)過程中,，病毒載量的變化是評估藥物有效性的重要指標(biāo),，借由數(shù)字PCR提供的***定量結(jié)果，能夠給出更具說服力和準(zhǔn)確的評價結(jié)果,。

數(shù)字PCR (Digital PCR) 技術(shù)作為新一代核酸檢測和***定量技術(shù),，目前在痕量核酸樣本檢測、復(fù)雜樣本稀有突變檢測和微小表達(dá)差異鑒定等方面表現(xiàn)出的優(yōu)勢已被普遍認(rèn)可,。NGS和CRISPR等分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,，為數(shù)字PCR技術(shù)在microRNA研究、基因組拷貝數(shù)精細(xì)鑒定,、致病微生物鑒定,、轉(zhuǎn)基因成分鑒定及基因細(xì)胞***等諸多領(lǐng)域帶來了新的契機。良好的引物探針設(shè)計是數(shù)字PCR實驗獲得成功的關(guān)鍵因素之一,。這正是眾多研究人員選擇LNA（鎖核酸技術(shù)）的原因——LNA修飾的引物和探針采用了成熟可靠的算法設(shè)計,，獲得了全世界科學(xué)家的信賴。轉(zhuǎn)基因食品或成分的檢測,。

數(shù)字PCR可以直接計算目標(biāo)序列的拷貝數(shù),，因此無需依賴于對照樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以進(jìn)行精確的***定量檢測；此外,，由于數(shù)字PCR在進(jìn)行結(jié)果判讀時*判斷有/無兩種擴增狀態(tài),，因此也不需要檢測熒光信號與設(shè)定閾值線的交點，完全不依賴于Ct值的鑒定,，因此數(shù)字PCR的反應(yīng)受擴增效率的影響**降低,，對PCR反應(yīng)抑制物的耐受能力**提高；數(shù)字PCR實驗中標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系分配的過程可以極大程度上降低與目標(biāo)序列有競爭性作用的背景序列濃度,，因此數(shù)字PCR技術(shù)也特別適合在復(fù)雜背景中檢測稀有突變,。影響引物探針特異性的因素有很多種，譬如純化方式、設(shè)計方法以及引物探針的修飾技術(shù)等,。廣東PCR數(shù)字PCR口碑推薦

一體化全自動的QIAcuity數(shù)字PCR系統(tǒng)很大程度解放了實驗人員的雙手,，同時又避免由于手動操作而引入的誤差。廣東Digital PCR數(shù)字PCR方案

肺*的ALK融合基因檢測：ALK融合基因是NSCLC患者另外一個常規(guī)的伴隨診斷,，可以指導(dǎo)ALK-TKI藥物的使用,，目前已發(fā)現(xiàn)20種以上EML4-ALK的融合形式，多個報道證實它們中大部分能促進(jìn)**生成,。另外ALK還可能與TFG,、KIF5B、KLC1,、PTPN3,、STRN等基因發(fā)生融合，因此ALK融合突變的診斷具有一定難度,。目前臨床常規(guī)使用的檢測手段包括免疫組化（Immunohistochemistry,，IHC），熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization,，F(xiàn)ISH）以及RT-PCR等三種,。這三種方法各具優(yōu)缺點：IHC相對簡單，價格低廉,，但是容易受到主觀判斷的影響,；FISH可以檢測各種融合類型，但是操作繁瑣,，價格昂貴,；RT-PCR方法的特異性較好，結(jié)果客觀,，但是只能針對已知類型,。近期有研究者采用數(shù)字PCR，利用ALK基因3’端的過表達(dá)來鑒定ALK的融合,，該方法既具有PCR方法特異性好,、結(jié)果客觀的優(yōu)勢，同時又不受融合類型的限制,，可以檢測所有融合型,，在與三種傳統(tǒng)方法的對比過程中展現(xiàn)出了更好的臨床符合率，未來有望成為一種新的常規(guī)檢測手段,。廣東Digital PCR數(shù)字PCR方案