穩(wěn)定轉染方法1.接種細胞：轉染前,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數（不建議用胰酶）,。調整細胞濃度,，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,，每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管,。PEI轉染試劑有沒有毒性,？CHO細胞PEI轉染試劑價格多少

穩(wěn)定轉染方法1.接種細胞：轉染前，用胰酶消化細胞并計數,。調整細胞濃度,，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，總體積如表1所示,，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管,，例如Falcon5mL/14mL離心管,。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物,。轉染3h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測,。轉染后快7h即可檢測到轉入基因的表達,。湖北PEI轉染試劑價格PEI轉染試劑從96孔板到1000L生物反應器規(guī)模都能提供連續(xù)性的高表達蛋白或病毒。

準備DNA-PEI復合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL離心管,。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物,。轉染3h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。

對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平,。如果選擇轉染前兩天鋪板,，可適當降低鋪板密度,，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,，可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到宜轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性,。4.對大多數細胞來而言,，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉染試劑進行優(yōu)化,。PEI轉染試劑主要用于用于抗體,、蛋白和病毒載體生產。

瞬時轉染方法1.接種細胞：轉染前一晚,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數（不建議用胰酶）,。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管,，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉染時,，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復合物,。轉染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細胞和分析結果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測,。轉染后5h即可檢測到轉入基因的表達,。請自行確定適合檢測時間PEI轉染試劑可以轉染哪些細胞？國產PEI轉染試劑中國代理權

PEI轉染試劑主要包括25K和40K的分子量,？CHO細胞PEI轉染試劑價格多少

方法：1．細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞,，用適當的完全培養(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90％）,。根據細胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染,。轉染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基。2.制備PEI-DNA混合物：以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應總體積為例,。準備兩支1.5mL離心管,，一管將質粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中，混勻,。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,，充分混勻后室溫靜置20-30min,。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中，輕輕搖動平皿混勻,，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育,。注：每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致,。3.培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養(yǎng)基,，繼續(xù)培養(yǎng)，16h左右可以觀測到報告基因的表達,。CHO細胞PEI轉染試劑價格多少

上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司是一家有著雄厚實力背景,、信譽可靠、勵精圖治,、展望未來,、有夢想有目標，有組織有體系的公司,，堅持于帶領員工在未來的道路上大放光明,，攜手共畫藍圖，在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康行業(yè)中積累了大批忠誠的客戶粉絲源,，也收獲了良好的用戶口碑,，為公司的發(fā)展奠定的良好的行業(yè)基礎，也希望未來公司能成為*****,，努力為行業(yè)領域的發(fā)展奉獻出自己的一份力量，我們相信精益求精的工作態(tài)度和不斷的完善創(chuàng)新理念以及自強不息,，斗志昂揚的的企業(yè)精神將**上海曼博生物醫(yī)藥科技供應和您一起攜手步入輝煌,，共創(chuàng)佳績,，一直以來，公司貫徹執(zhí)行科學管理,、創(chuàng)新發(fā)展,、誠實守信的方針，員工精誠努力,，協(xié)同奮取,，以品質、服務來贏得市場,，我們一直在路上,！