PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉染試劑-高度濃縮,,可制備大量轉染試劑Polysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,,因其較高的轉染效果,,已廣泛應用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,,每相隔二個碳原子,,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(protonsponge)體,。PEI可用作轉染試劑,,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時轉染試劑,。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,,大量科學家選擇PEIMAX,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉染試劑,。多年以來,,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評審的公開研究和出版文獻表明,在HEK293,、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉染效率,,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,可靠性強,。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應器持續(xù)的高基因表達細胞體系,,實現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度。而且與大多數(shù)細胞轉染方案相比,,使用PEIMAX至少可降低40%轉染成本(部分案例可降低90%轉染成本),。更多PEI MAX相關產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物,!無需復雜操作,,PEI試劑簡化基因導入流程。廣東PEI轉染試劑價格多少
瞬時轉染方法1.接種細胞:轉染前,,用膠原酶消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,總體積如表1所示,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管,。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細胞和分析結果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后快7h即可檢測到轉入基因的表達,。請自行確定檢測時間,。更多關于Polysciences PEI相關內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物!歡迎關注公眾號Mine-bio速溶型PEI轉染試劑好用么PEI轉染試劑適用于針對293和CHO細胞的瞬時轉染,。
1.對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平,。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化,。如有更多關于Polysciences PEI轉染試劑相關產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物,。
1.對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平,。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化。更多關于PEI轉染試劑相關產(chǎn)品技術問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,。也可關注我們的公眾號:Mine-bio,查看更多技術文章,!PEI轉染試劑包裝病毒的滴度有多高,?
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,,可適當降低鋪板密度,,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言,,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化,。Polysciences轉染與遞送相關產(chǎn)品已正式移交Kyfora Bio,,相關產(chǎn)品標簽將變更為Kyfora Bio by Polysciences,后續(xù)購買請認準備新品牌,。PEI轉染試劑主要包括25K和40K的分子量,?293細胞PEI轉染試劑作用原理
配制PEI轉染試劑的注意事項有哪些?廣東PEI轉染試劑價格多少
穩(wěn)定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。廣東PEI轉染試劑價格多少