穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）,。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),，請(qǐng)用圓底聚丙烯管,，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。PEI轉(zhuǎn)染試劑不含動(dòng)物源成分,。PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑授權(quán)代理商

材料：質(zhì)粒DNA指數(shù)生長(zhǎng)的真核細(xì)胞PEI（聚乙烯亞胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI儲(chǔ)存液（100μM）：稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中，0.2μm濾膜過(guò)濾,，儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS（pH7.4）：將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,，加入20ml1M的HEPES，調(diào)pH值到7.4,，定容至1L,，過(guò)濾（0.2μm濾膜）后儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩７椒ǎ?．細(xì)胞分盤：通過(guò)胰酶消化收集細(xì)胞,，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿,，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開(kāi)始轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無(wú)血清培養(yǎng)基,。四川低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑PEI轉(zhuǎn)染試劑的工作原理是什么？

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前,，用膠原酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，總體積如表1所示,，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）,。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),，請(qǐng)用圓底聚丙烯管,，例如Falcon5mL/14mL離心管。

PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗(yàn),。當(dāng)初試驗(yàn)經(jīng)費(fèi)很有限,，被逼無(wú)奈只能放棄脂質(zhì)體2000，選擇PEI,，以至于相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi),，轉(zhuǎn)染試驗(yàn)都不順利。下面是幾點(diǎn)關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點(diǎn)：1. PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說(shuō)明書,，所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2. 轉(zhuǎn)染時(shí),，一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中，順序不可錯(cuò),，輕微混勻，靜止20 min3. 轉(zhuǎn)染后4小時(shí),，一定要換液,！換含有FBS的完全培養(yǎng)液！因?yàn)镻EI對(duì)細(xì)胞毒性太大4. 如果后續(xù)試驗(yàn)涉及到穩(wěn)定篩選,，建議把血清濃度適當(dāng)提高,。PS：事實(shí)證明，PEI是可行的,，已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了,。25K和40K的PEI轉(zhuǎn)染試劑有哪些區(qū)別？

抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,，包括從Research grade到cGMP等級(jí)的無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基質(zhì),，轉(zhuǎn)染試劑、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑,、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務(wù),，支持ATMP（Advance Therapy Medicinal Products）藥物研發(fā)從R&D到Clinical trial以及后期商業(yè)化的無(wú)縫轉(zhuǎn)化,；以及提供藥物開(kāi)發(fā)和探索的抗體文庫(kù)定制和商業(yè)授權(quán)靈活的CHO工程細(xì)胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn)，以此希望幫助國(guó)內(nèi)科研工作者快速地接觸世界范圍內(nèi)的技術(shù),，分享研發(fā)工具進(jìn)步帶來(lái)的技術(shù)紅利,，終為細(xì)胞、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學(xué)行業(yè)等乃至整個(gè)生命科學(xué)行業(yè)賦能,！PEI轉(zhuǎn)染試劑是線性的好還是分支的好,？科研級(jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑如何儲(chǔ)存

哪個(gè)品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性價(jià)比高？PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑授權(quán)代理商

注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量：請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無(wú)內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）,。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA濃度,，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能,，請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性,。細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒(méi)有被細(xì)菌,、或支原體污染,。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次,。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞,。PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑授權(quán)代理商

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