細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學(xué)實驗室中常規(guī)的研究手段,，目的是把外源基因,、蛋白或者小分子導(dǎo)入到靶細胞內(nèi),。目前主要有三種主流方法：生物轉(zhuǎn)染,，物理轉(zhuǎn)染和化學(xué)轉(zhuǎn)染。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體,，以慢病毒,、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見，其侵染效率可以達到90%以上,，但常因安全性等問題,，很多實驗室對其敬而遠之。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射,、電穿孔和基因,，無論哪一種都需要特定的設(shè)備，且一分錢一分貨,，性能好的價格也都很性感,。上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,，更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題，歡迎咨詢上海曼博生物,！PEI轉(zhuǎn)染試劑會不會有毒性呢,？低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法

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瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細胞濃度,，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達,。上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,，更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題，歡迎咨詢上海曼博生物,！

對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度,，以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到宜轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑比較好,？

1.對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度,，以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化,。用PEI轉(zhuǎn)染試劑時，一般和DNA的比例是多少,？聚乙烯亞胺PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染步驟

25K和40K的PEI轉(zhuǎn)染試劑有哪些區(qū)別,？低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法

細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學(xué)實驗室中常規(guī)的研究手段，目的是把外源基因,、蛋白或者小分子導(dǎo)入到靶細胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法：生物轉(zhuǎn)染,，物理轉(zhuǎn)染和化學(xué)轉(zhuǎn)染,。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體，以慢病毒,、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見,，其侵染效率可以達到90%以上，但常因安全性等問題,，很多實驗室對其敬而遠之,。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,，無論哪一種都需要特定的設(shè)備,，且一分錢一分貨，性能好的價格也都相對較高,。低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法

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