線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物,，分子量25000，它能與核酸形成復(fù)合物,，并使該復(fù)合物進(jìn)入哺乳動物細(xì)胞,。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣適用于常見細(xì)胞系，如HEK-293,、HEK293T,、HepG2、Hela,、CHO-K1,、COS-1、COS-7,、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下,，它仍然能的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞,。78bio公司提供的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率,重組蛋白的高表達(dá)水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細(xì)胞毒性,易于操作?質(zhì)量控制每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過轉(zhuǎn)染測試。將eGFP表達(dá)質(zhì)粒（GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01）用EndoFectinTM-Plus轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的HEK-293細(xì)胞,，轉(zhuǎn)染16h后,，超過95%的細(xì)胞表達(dá)eGFP。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的產(chǎn)品信息,，歡迎咨詢上海曼博生物,！用PEI轉(zhuǎn)染時，一般和DNA的比例是多少,？核酸PEI轉(zhuǎn)染試劑好用么

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法：

1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度,，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。

2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管,。

3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。

4.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá),。

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細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗是生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗室中常規(guī)的研究手段,，目的是把外源基因,、蛋白或者小分子導(dǎo)入到靶細(xì)胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法：生物轉(zhuǎn)染,，物理轉(zhuǎn)染和化學(xué)轉(zhuǎn)染,。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體，以慢病毒,、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見,，其侵染效率可以達(dá)到90%以上，但常因安全性等問題,，很多實(shí)驗室對其敬而遠(yuǎn)之,。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,，無論哪一種都需要特定的設(shè)備,，且一分錢一分貨，性能好的價格也都相對較高,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑,，歡迎咨詢上海曼博生物,！

1、對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。

2,、對于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度,。

3,、即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。 有哪些比較好的轉(zhuǎn)染試劑,？

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度,，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）,。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性,。細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞,。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌、或支原體污染,。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次,。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞,。更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題，歡迎咨詢上海曼博生物,！PEI轉(zhuǎn)染試劑有哪些品牌,？MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑用途

用PEI轉(zhuǎn)染時，一般和DNA的比例會是多少呢,？核酸PEI轉(zhuǎn)染試劑好用么

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗是生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗室中常規(guī)的研究手段,，目的是把外源基因、蛋白或者小分子導(dǎo)入到靶細(xì)胞內(nèi),。目前主要有三種主流方法：生物轉(zhuǎn)染,，物理轉(zhuǎn)染和化學(xué)轉(zhuǎn)染,。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體，以慢病毒,、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見,，其侵染效率可以達(dá)到90%以上，但常因安全性等問題,，很多實(shí)驗室對其敬而遠(yuǎn)之,。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,，無論哪一種都需要特定的設(shè)備,，且一分錢一分貨，性能好的價格也都相對較高,。核酸PEI轉(zhuǎn)染試劑好用么