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增強慢病毒轉導實驗技巧

來源: 發(fā)布時間:2023-08-25

Sirion Biotech GmbH 公司于2007年在德國馬丁雷德成立,,此后一直致力于改變病毒載體供應的模式,。Sirion載體被用于基因功能研究、臨床前靶點驗證,、基因zhi liao和疫苗開發(fā),。Sirion Technologies獲得了歐洲和美國幾項主要臨床試驗(Phase I/II/III)的許可,是歐洲主要的病毒載體技術商業(yè)供應商,,在短時間內可提供quan mian的定制病毒載體組合,,并提供個性化項目管理服務。慢病毒載體的研究發(fā)展得很快,,研究的也非常深入,,在美國已經開展了臨床研究,效果非常理想,,因此具有廣闊的應用前景,。慢病毒也被guang fan地應用于表達RNAi的研究中。由于有些類型細胞轉染試劑瞬時轉染效果差,,轉移到細胞內的siRNA半衰期短,,體外合成siRNA對基因表達的抑制作用通常是短暫的,因而使其應用受到較大的限制,。SIRION Biotech 為研究機構和醫(yī)院開發(fā)了一種定制的許可模式,,并為臨床試驗提供良好的 GMP 材料供應條件。LentiBOOST 目前在美國和歐洲的多個臨床試驗中使用,。LentiBOOST(Pharma grade)jin用于藥物級的臨床前研究和工藝開發(fā),,以及評估研究。LentiBOOST(GMP grade)用于臨床階段方案,,目前美國和歐洲多個 Phase III 和 Phase I/II 臨床試驗正在進行,。什么可以增加慢病毒轉導的速度?增強慢病毒轉導實驗技巧

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慢病毒是一種有包膜的RNA病毒,,直徑為80-120nm,,呈二十面體對稱結構、球形,。病毒顆粒Zui外層是包膜(包膜蛋白決定了han ran細胞的類型),,再往里依次為基質蛋白和衣殼,Zui里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉錄酶,、整合酶和蛋白酶),。慢病毒han ran的xian zhu特點是han ran個體在出現(xiàn)典型的臨床癥狀之前,大多經歷長達數(shù)年的潛伏期,,之后緩慢發(fā)病,,因此這些病原體被稱為慢病毒,。慢病毒載體是指以人類免疫缺陷病毒-1 (HIV-1) 來源的一種病毒載體,慢病毒載體包含了包裝,、轉染,、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息,是慢病毒載體系統(tǒng)的主要組成部分,。攜帶有外源基因的慢病毒載體在慢病毒包裝質粒,、細胞系的輔助下,經過病毒包裝成為有han ran力的病毒顆粒,,通過han ran細胞或huo ti組織,,實現(xiàn)外源基因在細胞或huo ti組織中表達。更多關于Sirion Biotech LentiBOOST慢病毒轉導增強劑,,歡迎咨詢上海曼博生物,!研究級慢病毒轉導原理可以用什么做慢病毒轉染?

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人間充質干細胞 (MSCs) 的慢病毒轉導可誘導長期轉基因表達,,并為多種基因zhi liao應用帶來巨大希望,。Polybrene是實驗室研究中Zui常用的提高病毒基因轉導效率的試劑,但它未被批準用于人體,,并且還被證明會損害MSCs細胞的增殖和分化,。因此,優(yōu)化轉導方案以應用于臨床試驗是非常有必要的,。LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白是可替代的轉導增強劑,,可以按照現(xiàn)行的GMP標準生產,且很容易應用于現(xiàn)有的轉導方案,,并且曾被用于人類 CD34+ HSCs細胞的轉導研究,。慢病毒載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達目的序列的效果,。在gan ran能力方面可有效地gan ran神經元細胞,、肝細胞、心肌細胞,、腫瘤細胞,、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞,,從而達到良好的的基因zhi liao效果,。更多關于LentiBOOST慢病毒轉導的相關產品問題,歡迎咨詢上海曼博生物,!

LentiBOOST可廣泛應用于多種臨床相關細胞類型,,包括CD34+造血干細胞(HSCs),間充質干細胞(MSCs),,神經干細胞,,原代T細胞,NK細胞和成纖維細胞等,,對于難轉導的小鼠T細胞亦有效,。已成為改進體外基因zhi liao和CAR-T細胞zhi liao的臨床轉導方案的理想選擇。LentiBOOST是德國SirionBiotech開發(fā)的一種高效,、無細胞毒性的慢病毒轉導增強劑,,用于臨床前和臨床的慢病毒載體轉導。它是一種非離子型,、非受體依賴性的表面活性劑,,通過降低細胞膜粘稠度、提高脂質交換和跨膜轉運,,促進慢病毒與細胞膜的融合,,提高慢病毒轉導效率。目前LentiBOOST慢病毒轉導增強劑在美國和歐洲已有30多個藥物phaseIII/II/I臨床實驗中,,并有相關藥物已上市銷售,。有效果好的慢病毒轉導增強劑嗎?

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影響轉導效率的另一個關鍵參數(shù)是gan ran復數(shù)(MOI),MOI指的是每個細胞gan ran的病毒粒子個數(shù),,病毒粒子滴度以gan ran單位(IU)/mL 或 TU/mL表示,。慢病毒的gan ran能力隨細胞類型的不同而不同,因此每種不同的細胞類型需要不同的MOI,。MOI值越大,,慢病毒gan ran上的可能性也越大,gan ran效率越高,,但對細胞的毒性也越大,。另外細胞需要的MOI值越大,也說明細胞越難被轉導,。SIRION Biotech 為研究機構和醫(yī)院開發(fā)了一種定制的許可模式,,并為臨床試驗提供良好的 GMP 材料供應條件。LentiBOOST 目前在美國和歐洲的多個臨床試驗中使用,。更多關于LentiBOOST慢病毒轉導的相關產品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!慢病毒轉導增加可以使用哪些試劑,?快速慢病毒轉導毒性分析

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研究發(fā)現(xiàn) LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白的組合使用可以產生比polybrene更高的轉導效率,且對細胞活力或干細胞特性沒有劑量依賴性的不良影響,。這種轉導增強劑的組合dai biao了一種有價值的臨床兼容性polybrene替代方案,,具有顯著提高基因zhi liao應用中 MSCs 慢病毒轉導效率的潛力。細胞狀態(tài)對于慢病毒轉導效率也具有很大的影響,良好的生長狀態(tài)是達到高gan ran效率的保證,,一般選擇細胞形態(tài)較好,、輪廓清晰、處于對數(shù)生長期的細胞進行gan ran可提高gan ran效率,。更多關于Sirion Biotech LentiBOOST相關產品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!增強慢病毒轉導實驗技巧