對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,,可適當降低鋪板密度,,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性,。更多關于PEI轉染試劑相關產品問題,歡迎咨詢上海曼博生物,!用PEI轉染試劑為什么會出現(xiàn)沉淀,?聚乙烯亞胺PEI轉染試劑用途
穩(wěn)定轉染方法:1.接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管,。更多關于PEI轉染試劑相關的產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物,!In vivoPEI轉染試劑官方代理商哪個品牌的PEI轉染試劑不含動物源成分,?
注意事項質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內質粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內),。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性,。細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞,。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染,。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞,。
抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產品,,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質,轉染試劑,、病毒轉導試劑,、基因編輯工具等產品和定制服務,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉化,;以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權靈活的CHO工程細胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產,,以此希望幫助國內科研工作者快速地接觸世界范圍內的技術,分享研發(fā)工具進步帶來的技術紅利,,終為細胞,、基因產業(yè)以及再生醫(yī)學行業(yè)等乃至整個生命科學行業(yè)賦能!更多關于轉染試劑相關產品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!哪里有賣GMP等級的PEI轉染試劑?
對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,,可適當降低鋪板密度,,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到宜轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言,,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉染試劑進行優(yōu)化,。用PEI轉染試劑時,,一般和DNA的比例是多少?陽離子聚合物PEI轉染試劑
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上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司始終致力于為客戶提供一站式生物醫(yī)藥科技服務,,以創(chuàng)新和為價值理念,,通過自身研發(fā)團隊,以及與國內外專業(yè)科研團隊強強聯(lián)合,,不斷創(chuàng)新,,為生命科學和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)提供產品和服務。生物醫(yī)學工程是綜合應用生命科學與工程科學的原理和方法,,從工程學角度在分子,、細胞、組織,、乃至整個人體系統(tǒng)多層次認識人體的結構,、功能和其他生命現(xiàn)象,研究用于防病,、治病,、人體功能輔助及衛(wèi)生保健的人工材料、制品,、裝置和系統(tǒng)技術的總稱。聚乙烯亞胺PEI轉染試劑用途