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PolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理

來源: 發(fā)布時間:2023-10-21

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細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段,,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內(nèi),。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,,物理轉(zhuǎn)染和化學轉(zhuǎn)染。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體,,以慢病毒,、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見,其侵染效率可以達到90%以上,,但常因安全性等問題,,很多實驗室對其敬而遠之。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射,、電穿孔和基因,,無論哪一種都需要特定的設(shè)備,,且一分錢一分貨,性能好的價格也都相對較高,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑,,歡迎咨詢上海曼博生物!PolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理使用PEI轉(zhuǎn)染試劑時出現(xiàn)沉淀是什么原因,?

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接種細胞:轉(zhuǎn)染前,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復(fù)合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!

Polysciences是一家化學品制造公司,產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于各個科研領(lǐng)域,。公司成立于1961年,,起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,幫助科學家揭示未知領(lǐng)域,。隨后,,開拓了在病理(組織研究)應(yīng)用產(chǎn)品,,使組織除了石蠟包埋外,還能夠包埋在塑料塊中,;開發(fā)染料和染色劑,,以實現(xiàn)更好的樣品觀測方式。與government合作,,開發(fā)了用于診斷試劑盒應(yīng)的聚合物微球,。與美國國家cancer中心合作,開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品,,并用于紫杉醇的初步臨床試驗,。繼而開發(fā)出超順磁珠,用于DNA,、蛋白質(zhì)和肽的研究,。Polysciences的高純度單體和聚合物產(chǎn)品在醫(yī)療器械中有許多應(yīng)用,并不斷開發(fā)和增強其性能,。近期業(yè)務(wù)擴展到電子產(chǎn)品,,Polysciences的精密微粒子產(chǎn)品拓展了納米技術(shù)應(yīng)用中測量精度。公司秉承為應(yīng)用而研發(fā),,目前已擁有超過3000種產(chǎn)品,。PolysciencesInc.致力于提供先進的技術(shù)、制造能力和技術(shù)支持,,幫助客戶實現(xiàn)他們的目標,。上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性價比會比較高呢?

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對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑,,歡迎咨詢上海曼博生物!用PEI轉(zhuǎn)染試劑為什么會出現(xiàn)沉淀?SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑protocol

PEI轉(zhuǎn)染試劑是不含動物源成分的嗎?PolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理

1,、對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%,。

2、對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當降低鋪板密度,。

3、即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。 PolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理