PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑-高度濃縮,,可制備大量轉(zhuǎn)染試劑Polysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,,PEI)的產(chǎn)品,,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子,,每相隔二個碳原子,,即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體,。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑,。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,,大量科學(xué)家選擇PEIMAX,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑,。多年以來,,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評審的公開研究和出版文獻(xiàn)表明,在HEK293,、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率,,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,可靠性強(qiáng),。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應(yīng)器持續(xù)的高基因表達(dá)細(xì)胞體系,,實(shí)現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度。而且與大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染方案相比,,使用PEIMAX至少可降低40%轉(zhuǎn)染成本(部分案例可降低90%轉(zhuǎn)染成本),。如何申請PEI試用裝呢?高效率PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝測試
接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑,,歡迎咨詢曼博生物!想申請PEI試用裝,,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加,!高效率PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝測試PEI轉(zhuǎn)染試劑是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后,,通過胞吞進(jìn)入細(xì)胞。
PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)勢:高質(zhì)量的R&D和cGMP等級產(chǎn)品l高轉(zhuǎn)染效率,,低細(xì)胞毒性,;MAXgene符合cGMP標(biāo)準(zhǔn)和ISO13485質(zhì)量管理體系;經(jīng)過驗(yàn)證的生產(chǎn)工藝,;全合成,,無動物源成分;高性價(jià)比,,適用于從早期研發(fā)到臨床及商業(yè)化生產(chǎn)的各個階段l嚴(yán)格控制批間穩(wěn)定性,;國內(nèi)外已有多個項(xiàng)目進(jìn)入臨床階段l具備殘留檢測方法。PEI MAX 是一款高度濃縮的粉劑,,大量科學(xué)家選擇PEI MAX ,,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑。多年以來,,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評審的公開研究和出版文獻(xiàn)表明,,在HEK293、CHO 和 Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率,,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,,可靠性強(qiáng)。PEI MAX是一種非GMP等級PEI轉(zhuǎn)染試劑,,適用于基礎(chǔ)科學(xué)研究及藥物研發(fā)早期階段,。如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,,即可參加,!
對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細(xì)胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞,,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到宜轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細(xì)胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化,。如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,,即可參加!?有誰用過Polysciences的PEI轉(zhuǎn)染試劑,?
準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請用圓底聚丙烯管,,例如Falcon5mL/14mL離心管,。轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染3h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請PEI試用裝,,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加,!?23966-1和24765-1的PEI轉(zhuǎn)染試劑在哪里買呢,?高效率PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝測試
轉(zhuǎn)染效率好的PEI轉(zhuǎn)染試劑是哪個品牌?高效率PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝測試
PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗(yàn),。當(dāng)初試驗(yàn)經(jīng)費(fèi)很有限,,被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,選擇PEI,,以至于相當(dāng)長的時(shí)間內(nèi),,轉(zhuǎn)染試驗(yàn)都不順利。下面是幾點(diǎn)關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點(diǎn):1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,,所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時(shí),,一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,順序不可錯,,輕微混勻,,靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時(shí),一定要換液,!換含有FBS的完全培養(yǎng)液,!因?yàn)镻EI對細(xì)胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗(yàn)涉及到穩(wěn)定篩選,建議把血清濃度適當(dāng)提高,。PS:事實(shí)證明,,PEI是可行的,已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的信息,,可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司!?如想申請PEI試用裝,,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加,!?高效率PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝測試