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PolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑使用說明

來源: 發(fā)布時間:2024-09-23

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒),。通過260nm光吸收測定DNA濃度,,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性,。細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌,、或支原體污染,。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次,。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞,。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物,!歡迎關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,,回復關(guān)鍵詞“申請PEI”,即可參加活動,!更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品信息,,歡迎咨詢上海曼博生物,!用PEI轉(zhuǎn)染時,一般和DNA的比例會是多少?PolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑使用說明

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穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑蛋白產(chǎn)量哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率更好?

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PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗,。當初試驗經(jīng)費很有限,,被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,選擇PEI,,以至于相當長的時間內(nèi),,轉(zhuǎn)染試驗都不順利,。下面是幾點關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,,所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時,一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,,順序不可錯,,輕微混勻,,靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時,一定要換液,!換含有FBS的完全培養(yǎng)液,!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,建議把血清濃度適當提高,。PS:事實證明,,PEI是可行的,已經(jīng)做出穩(wěn)定細胞系了,。近期還有PEIfree申請活動,,歡迎咨詢上海曼博生物!歡迎關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,,回復關(guān)鍵詞“申請PEI”,,即可參加活動!更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品信息,,歡迎咨詢上海曼博生物,!

產(chǎn)品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品,。相比于PEI25K,,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙酰化),;2.鹽酸鹽形式,,具更高的水溶特性;3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,,其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上,。應(yīng)用領(lǐng)域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑,適用于基礎(chǔ)學術(shù)研究和藥物研發(fā)早期階段,,以固體粉末形式提供,,需用戶自行配置(詳情見使用方法)。如想申請PEI試用裝,,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,,回復關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加,!哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性價比比較高,?

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PEI轉(zhuǎn)染試劑的殘留檢測方法是什么,?PolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑使用說明

細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段,,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內(nèi),。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,,物理轉(zhuǎn)染和化學轉(zhuǎn)染。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體,,以慢病毒,、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見,其侵染效率可以達到90%以上,,但常因安全性等問題,,很多實驗室對其敬而遠之。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射,、電穿孔和基因,,無論哪一種都需要特定的設(shè)備,且一分錢一分貨,,性能好的價格也都相對較高,。如想申請試用裝,請關(guān)注公眾號:Mine-bio,,回復“申請PEI”,,即可參加!PolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑使用說明