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產(chǎn)品特點(diǎn):PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級(jí)產(chǎn)品。相比于PEI25K,,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙酰化),;2.鹽酸鹽形式,具更高的水溶特性,;3.含更長(zhǎng)連續(xù)性乙烯亞胺片段,,其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應(yīng)用領(lǐng)域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級(jí)的PEI轉(zhuǎn)染試劑,,適用于基礎(chǔ)學(xué)術(shù)研究和藥物研發(fā)早期階段,,以固體粉末形式提供,需用戶自行配置(詳情見(jiàn)使用方法),。更多關(guān)于KyforaBiobyPolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑,,歡迎咨詢上海曼博生物!為什么PEI轉(zhuǎn)染試劑配制的過(guò)程中要加酸,?山東高性價(jià)比PEI轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:KyforaBiobyPolysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn),。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子,每相隔二個(gè)碳原子,,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”體(protonsponge)。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞,。有實(shí)驗(yàn)證明,分子量為25000的線性PEI即KyforaBiobyPolysciences23966(PEI25K)轉(zhuǎn)染效率表現(xiàn)優(yōu)良,。產(chǎn)品特點(diǎn):適用于生產(chǎn)mABs,、rAbs、bsABs和病毒載體(AVV、LV,、BEV);在HEK293,、CHO和Sf9細(xì)胞系中高度有效,;適用于從研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的各個(gè)階段;可預(yù)測(cè),,可大規(guī)模生產(chǎn),;兩周內(nèi)即可生成大量目標(biāo)蛋白或病毒;高轉(zhuǎn)染效率,;大量已發(fā)表的文獻(xiàn)支持,。PEI轉(zhuǎn)染試劑溶解度Polysciences的PEI轉(zhuǎn)染試劑品質(zhì)如何?
材料:質(zhì)粒DNA指數(shù)生長(zhǎng)的真核細(xì)胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲(chǔ)存液(100μM):稱(chēng)取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,,0.2μm濾膜過(guò)濾,,儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,加入20ml1M的HEPES,,調(diào)pH值到7.4,,定容至1L,過(guò)濾(0.2μm濾膜)后儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆?。方法?.細(xì)胞分盤(pán):通過(guò)胰酶消化收集細(xì)胞,,用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿,使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90%),。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開(kāi)始轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無(wú)血清培養(yǎng)基。歡迎咨詢上海曼博生物,。
上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司始終致力于為客戶提供一站式生物醫(yī)藥科技服務(wù),,以創(chuàng)新和為價(jià)值理念,通過(guò)自身研發(fā)團(tuán)隊(duì),,以及與國(guó)內(nèi)外專(zhuān)業(yè)科研團(tuán)隊(duì)強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合,,不斷創(chuàng)新,為生命科學(xué)和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)提供產(chǎn)品和服務(wù),。生物醫(yī)學(xué)工程是綜合應(yīng)用生命科學(xué)與工程科學(xué)的原理和方法,,從工程學(xué)角度在分子、細(xì)胞,、組織,、乃至整個(gè)人體系統(tǒng)多層次認(rèn)識(shí)人體的結(jié)構(gòu)、功能和其他生命現(xiàn)象,,研究用于防病,、治病、人體功能輔助及衛(wèi)生保健的人工材料、制品,、裝置和系統(tǒng)技術(shù)的總稱(chēng),。也歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,查看更多技術(shù)文章,!PEI轉(zhuǎn)染試劑保存條件是什么,?
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細(xì)胞濃度,,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,總體積如表1所示,,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序),。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),,請(qǐng)用圓底聚丙烯管,,例如Falcon5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),,去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,替換成無(wú)血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。4.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè),。轉(zhuǎn)染后快7h即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。請(qǐng)自行確定檢測(cè)時(shí)間,。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物,!歡迎關(guān)注公眾號(hào)Mine-bio想購(gòu)買(mǎi)24765-1在哪里可以買(mǎi)?陽(yáng)離子聚合物PEI轉(zhuǎn)染試劑protocol
無(wú)需昂貴設(shè)備,,PEI試劑實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)高效率的基因轉(zhuǎn)染方案,。山東高性價(jià)比PEI轉(zhuǎn)染試劑
對(duì)于某些類(lèi)型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無(wú)蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)而言,,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化,。Polysciences轉(zhuǎn)染與遞送相關(guān)產(chǎn)品已正式移交Kyfora Bio,,相關(guān)產(chǎn)品標(biāo)簽將變更為Kyfora Bio by Polysciences,后續(xù)購(gòu)買(mǎi)請(qǐng)認(rèn)準(zhǔn)備新品牌,。山東高性價(jià)比PEI轉(zhuǎn)染試劑