穩(wěn)定轉染方法：1.接種細胞：轉染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）,。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,，每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管,，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉染時,，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復合物,。轉染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。歡迎關注我們的公眾號：Mine-bio PEI轉染試劑主要成分是什么,？低毒性PEI轉染試劑優(yōu)化要素

產(chǎn)品特點：PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式（LinearPolyethylenimineHydrochloride），是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品,。相比于PEI25K,，PEIMAX40K：1.完全水解（去乙酰化）,；2.鹽酸鹽形式,，具更高的水溶特性；3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,，其質子化氮水平比PEI25K提高11%以上,。應用領域：PEIMAX40K（cat#24765）是一款非GMP等級的PEI轉染試劑，適用于基礎學術研究和藥物研發(fā)早期階段,，以固體粉末形式提供,，需用戶自行配置（詳情見使用方法）。也歡迎關注我們的公眾號：Mine-bio,，查看更多詳情信息,！Thermo FisherPEI轉染試劑市場報價用PEI轉染時，一般和DNA的比例是多少?

對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化,。Polysciences轉染與遞送相關產(chǎn)品已正式移交Kyfora Bio，相關產(chǎn)品標簽將變更為Kyfora Bio by Polysciences,，后續(xù)購買請認準備新品牌,。

PEI在于可以應用于體內試驗。當初試驗經(jīng)費很有限,，被逼無奈只能放棄脂質體2000,，選擇PEI，以至于相當長的時間內,，轉染試驗都不順利,。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點：1.PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書，所用質粒盡量去內2.轉染時,，一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中,，順序不可錯，輕微混勻,，靜止20min3.轉染后4小時,，一定要換液！換含有FBS的完全培養(yǎng)液,！因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,，建議把血清濃度適當提高。PS：事實證明,，PEI是可行的,，已經(jīng)做出穩(wěn)定細胞系了。Polysciences轉染與遞送相關產(chǎn)品已正式移交KyforaBio,，相關產(chǎn)品標簽將變更為KyforaBiobyPolysciences,，后續(xù)購買請認準備新品牌,。更多關于PEI轉染試劑相關的信息，可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司,！哪里可以買到23966-1,？

注意事項質粒質量：請務必使用高質量轉染級無內質粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度,，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應該在1.8~2.0的范圍之內）,。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性,。細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞,。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染,。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞,。如想申請PEI試用裝,，歡迎關注公眾號：Mine-bio，回復“申請PEI”,，即可參加,！配制PEI轉染試劑的注意事項有哪些？速溶型PEI轉染試劑品牌

PEI轉染試劑是一種陽離子聚合物轉染試劑,。低毒性PEI轉染試劑優(yōu)化要素

抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,，包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質，轉染試劑,、病毒轉導試劑,、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務，支持ATMP（AdvanceTherapyMedicinalProducts）藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉化,；以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權靈活的CHO工程細胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn),，以此希望幫助國內科研工作者快速地接觸世界范圍內的技術，分享研發(fā)工具進步帶來的技術紅利,，終為細胞,、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學行業(yè)等乃至整個生命科學行業(yè)賦能！若想咨詢更多關于PEI轉染試劑相關信息,，歡迎咨詢上海曼博生物,！也歡迎關注曼博的公眾號Mine-bio，查看更多技術文章,！低毒性PEI轉染試劑優(yōu)化要素