上??颇偷献灾餮邪l(fā)生產(chǎn)的一款新型電動(dòng)執(zhí)行器助力企業(yè)實(shí)現(xiàn)智能化
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創(chuàng)新電動(dòng)執(zhí)行器助力工業(yè)自動(dòng)化,實(shí)現(xiàn)高效生產(chǎn)
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產(chǎn)品特點(diǎn):PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),,是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級(jí)產(chǎn)品,。相比于PEI25K,,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙?;?;2.鹽酸鹽形式,具更高的水溶特性,;3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,,其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應(yīng)用領(lǐng)域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級(jí)的PEI轉(zhuǎn)染試劑,,適用于基礎(chǔ)學(xué)術(shù)研究和藥物研發(fā)早期階段,,以固體粉末形式提供,需用戶自行配置(詳情見使用方法),。歡迎關(guān)注曼博生物公眾號(hào):Mine-bioPEI轉(zhuǎn)染試劑和其他轉(zhuǎn)染試劑相比有什么優(yōu)勢(shì),?科研級(jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑配置方法
PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑-高度濃縮,可制備大量轉(zhuǎn)染試劑KyforaBiobyPolysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,,PEI)的產(chǎn)品,,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn),。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子,,每相隔二個(gè)碳原子,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體,。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞,。PEIMAX40K是由KyforaBiobyPolysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑,。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,大量科學(xué)家選擇PEIMAX,,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑,。多年以來,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評(píng)審的公開研究和出版文獻(xiàn)表明,,在HEK293,、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,,可靠性強(qiáng),。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應(yīng)器持續(xù)的高基因表達(dá)細(xì)胞體系,實(shí)現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度,。而且與大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染方案相比,,使用PEIMAX至少可降低40%轉(zhuǎn)染成本(部分案例可降低90%轉(zhuǎn)染成本)。血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑常見問題哪個(gè)品牌的P日轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率更高呢?
1.對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細(xì)胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,,可適當(dāng)降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,,可適當(dāng)降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化,。歡迎關(guān)注公眾號(hào):Mine-bio
1.對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細(xì)胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,,可適當(dāng)降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,,可適當(dāng)降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來而言,,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問題,,歡迎咨詢上海曼博生物。也可關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,,查看更多技術(shù)文章,!優(yōu)化配方,PEI轉(zhuǎn)染試劑減少細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng),,保護(hù)細(xì)胞活性,。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請(qǐng)用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于Kyfora Bio by Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!PEI轉(zhuǎn)染試劑的主要分子量是多少呢?血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑常見問題
PEI轉(zhuǎn)染試劑適用于針對(duì)293和CHO細(xì)胞的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,??蒲屑?jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑配置方法
Polysciences 轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子,,每相隔二個(gè)碳原子,,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”體(proton sponge),。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞,。有實(shí)驗(yàn)證明,分子量為25000的線性PEI即Polysciences 23966(PEI 25K)轉(zhuǎn)染效率表現(xiàn)優(yōu)良,??蒲屑?jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑配置方法