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云南MSC培養(yǎng)PEI轉(zhuǎn)染試劑

來源: 發(fā)布時(shí)間:2025-04-13

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注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)),。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性,。細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞,。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌、或支原體污染,。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,,請?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞,。如有更多關(guān)于PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,歡迎咨詢上海曼博生物,!天津進(jìn)口PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理Polysciences的PEI轉(zhuǎn)染試劑品質(zhì)如何,?

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PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑-高度濃縮,,可制備大量轉(zhuǎn)染試劑Polysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子,,每相隔二個(gè)碳原子,,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體,。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑,。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,,大量科學(xué)家選擇PEIMAX,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑,。多年以來,,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評審的公開研究和出版文獻(xiàn)表明,在HEK293,、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率,,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,可靠性強(qiáng),。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應(yīng)器持續(xù)的高基因表達(dá)細(xì)胞體系,,實(shí)現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度。而且與大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染方案相比,,使用PEIMAX至少可降低40%轉(zhuǎn)染成本(部分案例可降低90%轉(zhuǎn)染成本),。更多PEI MAX相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物,!PEI轉(zhuǎn)染試劑的使用方法是怎樣的,?

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瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法:1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細(xì)胞濃度,,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá),。請自行確定適合檢測時(shí)間,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物,!用PEI轉(zhuǎn)染時(shí),,一般和DNA的比例是?重慶進(jìn)口PEI轉(zhuǎn)染試劑

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