對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,，可適當(dāng)降低鋪板密度,，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,，可適當(dāng)降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。Polysciences 是一家化學(xué)品制造公司,，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于各個(gè)科研領(lǐng)域,。公司成立于1961年，起初為電子顯微鏡提供納米級(jí)樣本制備方案,，幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域,。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)產(chǎn)品信息,，歡迎咨詢上海曼博生物！也歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio,，查看更多技術(shù)文章！PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種穩(wěn)定的具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子,。云南高質(zhì)量PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理

接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細(xì)胞濃度,，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）,。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。Polysciences轉(zhuǎn)染與遞送相關(guān)產(chǎn)品已正式移交KyforaBio，相關(guān)產(chǎn)品標(biāo)簽將變更為KyforaBiobyPolysciences,，后續(xù)購(gòu)買請(qǐng)認(rèn)準(zhǔn)備新品牌,。福建PEI轉(zhuǎn)染試劑哪個(gè)品牌好PEI轉(zhuǎn)染試劑如何溶解和配置？

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法：1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一晚,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）,。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),，請(qǐng)用圓底聚丙烯管,，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。更多關(guān)于Kyfora Bio by Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題，歡迎咨詢上海曼博生物,！

材料：質(zhì)粒DNA指數(shù)生長(zhǎng)的真核細(xì)胞PEI（聚乙烯亞胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI儲(chǔ)存液（100μM）：稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中,，0.2μm濾膜過濾，儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS（pH7.4）：將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,，加入20ml1M的HEPES,，調(diào)pH值到7.4，定容至1L,，過濾（0.2μm濾膜）后儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆?。方法?．細(xì)胞分盤：通過胰酶消化收集細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿,，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）,。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基,。更多產(chǎn)品信息,，歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉(zhuǎn)染試劑是不是可以保存在4度,？

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法：1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一晚,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度,，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。歡迎咨詢上海曼博生物！歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào)Mine-bioPEI MAX 是一款高度濃縮的粉劑,，大量科學(xué)家選擇PEI MAX ,，在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑。高性價(jià)比PEI轉(zhuǎn)染試劑protocol

PEI轉(zhuǎn)染試劑的工作原理是什么,？云南高質(zhì)量PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理

Transporter 5轉(zhuǎn)染試劑是一種非GMP等級(jí)的即用型線性聚乙烯亞胺（PEI轉(zhuǎn)染試劑）溶液,，由PEI MAX配置而成，采用0.1um PES無菌過濾器,，完全消除支原體污染風(fēng)險(xiǎn),。Transporter 5將DNA縮聚成帶正電荷的復(fù)合物，這些復(fù)合物很容易通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,，并且Transporter 5-DNA 復(fù)合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,，有效提高轉(zhuǎn)染效率。適用于工藝開發(fā),、臨床前和早期臨床研究,，可無縫過渡到MAXgene GMP用于商業(yè)化生產(chǎn)。Transporter 5轉(zhuǎn)染試劑能高效地將DNA轉(zhuǎn)染入HEK-293,、CHO,、COS、HELA,、昆蟲（SF9,、SF21） 等真核細(xì)胞系，可作用于大到135,000個(gè)核苷酸的質(zhì)粒,，所以較大的質(zhì)粒也可以成功地轉(zhuǎn)染,。 Transporter 5可節(jié)省試劑準(zhǔn)備時(shí)間，加快項(xiàng)目進(jìn)度,。經(jīng)過嚴(yán)格的性能檢測(cè),，確保品質(zhì),，在新藥研發(fā)過程中是一款快速、重復(fù)性好,、可用于批量產(chǎn)的轉(zhuǎn)染試劑,。產(chǎn)品特點(diǎn)：非GMP，研究級(jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑溶液,；高轉(zhuǎn)染效率,；無縫過渡到MAXgene GMP,；易放大,，可預(yù)測(cè)產(chǎn)量；用于工藝開發(fā),，臨床前和早期臨床研究,。云南高質(zhì)量PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理