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HLA-A2糖尿病細(xì)胞模型糖尿病研究策略

來源: 發(fā)布時間:2025-05-04

在胰島細(xì)胞刺激中,,基礎(chǔ)和高D-葡萄糖條件之間的刺激指數(shù)為11.6±1.8,。通過應(yīng)用不引起胰島素分泌的L-葡萄糖(20mM)或完全阻斷D-葡萄糖誘導(dǎo)的鉀通道開放劑二氮嗪(100mM),驗(yàn)證了胰島素分泌對D-葡萄糖的特異性,。胰島素分泌以D-葡萄糖濃度依賴性方式增加,,從0mMD-葡萄糖時的68.827.3增加到16.7mMD-葡萄糖時的679.2±39.5ng/h/106細(xì)胞。胰島素分泌增加Zui快的是5.5至8mMD-葡萄糖,,分別有204.7±51.3和414.9±94.8ng/h/106細(xì)胞,。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細(xì)胞模型。通過多輪次優(yōu)化改良,,獲得的功能胰腺B細(xì)胞,,無限接近天然人源胰島B細(xì)胞,其胰島素分泌功能與天然細(xì)胞類似,,基于PDX1/NKX6.1關(guān)鍵基因驗(yàn)證的細(xì)胞均一性達(dá)到90%以上(左圖),,在2.8 mM and 11 mM葡萄糖劑量下表現(xiàn)出10倍的胰島素分泌反應(yīng)(右圖),,對GLP-1R激動劑, Exendin4刺激產(chǎn)生明細(xì)那反饋,, 且可實(shí)現(xiàn)批量化生成,,實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定供應(yīng)。
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在EndoC-βH5細(xì)胞中檢測到所有對β細(xì)胞身份和功能重要的轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá),。與成人b細(xì)胞相比,,EndoC-βH5細(xì)胞中的表達(dá)水平相似(FOXA2、MNX1,、NKX2.2)或更高(HOPX,、MAFB、NEUROD1,、PAX6,、PDX1)。GLIS3,、NKX6.1和MAFA在EndoC-βH5細(xì)胞中以較低水平表達(dá)EndoC-βH5細(xì)胞中表達(dá)與胰島素分泌相關(guān)的受體,,包括腎上腺素(ADRA2A)、脂肪酸(FFAR1,、FFAR3),、GABA(GABRB3),、胰haoxuetang素(GCGR)、生長抑素(SSTR2)和腸jiangxuetang素受體,,例如胰gaoxuetang素樣受體肽-1(GLP1R)和胃抑制多肽(GIPR),。重要的是,EndoC-βH5細(xì)胞中的GLP1R,、GIPR和GCGR比EndoC-bH1細(xì)胞中更豐富.

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這些小鼠在2至3個月內(nèi)出現(xiàn)低血糖,,胰島素陽性細(xì)胞大量擴(kuò)增。這種體內(nèi)擴(kuò)增有助于維持大量增殖的胰島素細(xì)胞,,并允許定義允許的培養(yǎng)條件,,在這種條件下,可以在體外建立永生化細(xì)胞系,。HumanCellDesign(HCD)開發(fā)了一種用于在人類胎兒組織中使用靶向Zhongliu產(chǎn)生功能的人類β細(xì)胞系,。在胰島素啟動子的控制下,用表達(dá)SV40LT的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)人類胎兒胰腺芽,。HumanCellDesign開發(fā)了創(chuàng)新且安全的人類β細(xì)胞系生產(chǎn)方法,。首先,將每個轉(zhuǎn)導(dǎo)的人類胎兒胰腺芽移植到2或3只SCID小鼠的腎被膜下,,因?yàn)樵摬课皇侨祟愐认侔l(fā)育的允許部位,。在6到8個月內(nèi),所有移植的小鼠都發(fā)生了原發(fā)性胰島素瘤,,這導(dǎo)致它們的血糖水平下降,。與其他胰腺移植相比,,原發(fā)性胰島素瘤是高度血管化的。然后將原發(fā)性胰島素瘤中這些高度血管化的區(qū)域分離,,用在大鼠胰島素啟動子控制下表達(dá)hTERT的慢病毒進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo),,并移植到其他SCID小鼠中。更多關(guān)于HumanCellDesign的產(chǎn)品信息,,歡迎咨詢AlibioBuy,。EndoC-B h1表達(dá)了許多B細(xì)胞特異性標(biāo)記,而沒有任何其他胰腺細(xì)胞類型標(biāo)記的實(shí)質(zhì)性表達(dá),。北京人胎兒胰腺組織糖尿病細(xì)胞模型

糖尿病細(xì)胞模型永生化人B細(xì)胞系需要在無菌條件下進(jìn)行操作,。HLA-A2糖尿病細(xì)胞模型糖尿病研究策略

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