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血清兼容PEI轉染試劑優(yōu)化方案

來源: 發(fā)布時間:2025-05-11

瞬時轉染方法1.接種細胞:轉染前,用膠原酶消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,總體積如表1所示,,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,,例如Falcon5mL/14mL離心管,。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測,。轉染后快7h即可檢測到轉入基因的表達,。請自行確定檢測時間,。更多關于Polysciences PEI轉染試劑相關內容歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉染試劑適用于針對293和CHO細胞的瞬時轉染,。血清兼容PEI轉染試劑優(yōu)化方案

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穩(wěn)定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。歡迎咨詢上海曼博生物!歡迎關注我們的公眾號Mine-bio天津垂直輪PEI轉染試劑官方代理PEI轉染試劑使用的注意事項有哪些,?

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穩(wěn)定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物,!

注意事項質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內質粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒),。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內),。如有可能,,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞,。確保培養(yǎng)基沒有被細菌,、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,,請在轉染前至少傳代兩次,。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。更多Polysciences PEI轉染試劑等相關產(chǎn)品信息,,歡迎咨詢上海曼博生物!近期還有PEI試用裝申請活動,,可關注我們的公眾號:Mine-bio快速起效,,PEI助力科研人員在短時間內獲得轉染結果。

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對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平,。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性,。Polysciences轉染與遞送相關產(chǎn)品已正式移交Kyfora Bio,相關產(chǎn)品標簽將變更為Kyfora Bio by Polysciences,,后續(xù)購買請認準備新品牌,。更多關于PEI轉染試劑相關產(chǎn)品技術問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!專為細胞實驗設計,,PEI轉染試劑提升基因表達效率。血清兼容PEI轉染試劑優(yōu)化方案

哪個品牌的P日轉染試劑轉染效率更高呢?血清兼容PEI轉染試劑優(yōu)化方案

產(chǎn)品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),,是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品,。相比于PEI25K,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙?;?.鹽酸鹽形式,,具更高的水溶特性;3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,,其質子化氮水平比PEI25K提高11%以上,。應用領域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉染試劑,,適用于基礎學術研究和藥物研發(fā)早期階段,,以固體粉末形式提供,需用戶自行配置(詳情見使用方法),。歡迎關注曼博生物公眾號:Mine-bio血清兼容PEI轉染試劑優(yōu)化方案