PEIMAX粉末配置方法:1)將1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃燒杯中,;2)放入攪拌轉子,放置于磁力攪拌器上,,設置攪拌程序以形成一個較小的漩渦,;3)等待PEIMAX40K完全溶解,通常需要5分鐘左右,;4)用25mL塑料移液管加入1N氫氧化鈉滴定至pH6.9~7.1,;5)如果不小心超過7.1,則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管將pH重新滴定至6.9~7.1,;6)將溶液轉移到1L玻璃量筒中,,加入水定容至1L;7)用無菌真空過濾膜過濾配制的轉染試劑溶液,;8)按需分裝,,4°C儲存(切記不可冷凍),;注:未經(jīng)配制的粉末有效期為2年。配置成液體后分裝在合適的瓶子中,,并且保存在4℃的轉染試劑將可在6個月之內(nèi)保持性能,。如jin用于蛋白定性研究,分裝的轉染試劑可延長有效使用期至1年,。
中國地區(qū)代理Polysciences PEI轉染試劑的是誰,?進口PEI轉染試劑優(yōu)化方案
注意事項質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內(nèi)質粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)),。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性,。細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞,。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染,。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞,。歡迎關注曼博生物公眾號:Mine-bio不同分子量PEI轉染試劑配置方法PEI轉染試劑是一種陽離子聚合物轉染試劑,。
穩(wěn)定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉染時,,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物,。轉染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。若想咨詢更多關于PEI轉染試劑相關信息,,歡迎咨詢上海曼博生物,!
上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年,依托于集團公司泉心泉意深厚的資源和超過400家國內(nèi)客戶群體,,生命科學領域一站式供應鏈體系,,以及高風險生物危險材料進出口平臺的優(yōu)勢,曼博生物嚴格篩選國際創(chuàng)新且經(jīng)過同行驗證過的產(chǎn)品和技術,,引入中國市場,,開發(fā)、孵育和推廣,,致力于將全球創(chuàng)新產(chǎn)品和前沿技術帶入中國,,集中在為細胞/基因領域、/免疫,,抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質,轉染試劑,、病毒轉導試劑,、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉化,。更多關于Polysciences PEI相關產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-Bio.哪個品牌的PEI轉染試劑性價比會比較高呢,?
PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉染試劑-高度濃縮,可制備大量轉染試劑KyforaBiobyPolysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,,PEI)的產(chǎn)品,,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于工業(yè)化生產(chǎn),。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(protonsponge)體,。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞,。PEIMAX40K是由KyforaBiobyPolysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時轉染試劑,。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,,大量科學家選擇PEIMAX,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉染試劑,。多年以來,,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評審的公開研究和出版文獻表明,在HEK293,、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉染效率,,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,可靠性強,。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應器持續(xù)的高基因表達細胞體系,,實現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度。而且與大多數(shù)細胞轉染方案相比,,使用PEIMAX至少可降低40%轉染成本(部分案例可降低90%轉染成本),。有誰用過Polysciences的PEI轉染試劑?CHO細胞PEI轉染試劑配置方法
用PEI轉染試劑為什么會出現(xiàn)沉淀,?進口PEI轉染試劑優(yōu)化方案
1.對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平,。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化。更多關于PEI轉染試劑相關產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!歡迎關注我們的公眾號Mine-bio進口PEI轉染試劑優(yōu)化方案