抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質(zhì),轉(zhuǎn)染試劑,、病毒轉(zhuǎn)導試劑,、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉(zhuǎn)化,;以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權(quán)靈活的CHO工程細胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn),,以此希望幫助國內(nèi)科研工作者快速地接觸世界范圍內(nèi)的技術,分享研發(fā)工具進步帶來的技術紅利,,終為細胞,、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學行業(yè)等乃至整個生命科學行業(yè)賦能!更多關于轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio PEI轉(zhuǎn)染試劑用什么溶劑配制?陽離子聚合物PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理商
PEI在于可以應用于體內(nèi)試驗,。當初試驗經(jīng)費很有限,,被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,,選擇PEI,以至于相當長的時間內(nèi),,轉(zhuǎn)染試驗都不順利,。下面是幾點關于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時,,一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,,順序不可錯,輕微混勻,,靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時,,一定要換液!換含有FBS的完全培養(yǎng)液,!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,,建議把血清濃度適當提高。PS:事實證明,,PEI是可行的,,已經(jīng)做出穩(wěn)定細胞系了。更多關于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關的信息,,可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司,!更多關于Kyfora Bio by Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物,!40KPEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理PEI轉(zhuǎn)染試劑包裝病毒的滴度有多高,?
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,,可適當降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。更多關于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品技術問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-Bio,查看更多技術文章!
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio PEI轉(zhuǎn)染試劑在使用時出現(xiàn)沉淀的原因是什么,?
1.對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化,。更多關于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物,。也可關注我們的公眾號:Mine-bio,,查看更多技術文章!PEI轉(zhuǎn)染試劑主要成分是什么,?湖北PEI轉(zhuǎn)染試劑
PEI轉(zhuǎn)染試劑的使用方法是怎樣的,?陽離子聚合物PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理商
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。陽離子聚合物PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理商