穩(wěn)定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物,。轉染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。近期還有PEIfree申請活動,,歡迎咨詢上海曼博生物,!PEI轉染試劑和其他轉染試劑相比有什么優(yōu)勢呢?MirusPEI轉染試劑優(yōu)化要素
PEIMAX-----高產(chǎn)工業(yè)化轉染試劑-高度濃縮,,可制備大量轉染試劑Polysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉染效果,,已大量應用于工業(yè)化生產(chǎn),。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(protonsponge)體,。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞,。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時轉染試劑,。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,大量科學家選擇PEIMAX,,在內部自行制備低成本高效益的PEI轉染試劑,。多年以來,經(jīng)過眾多業(yè)內人士評審的公開研究和出版文獻表明,,在HEK293,、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉染效率,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,,可靠性強,。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應器持續(xù)的高基因表達細胞體系,實現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度,。而且與大多數(shù)細胞轉染方案相比,,使用PEIMAX至少可降低40%轉染成本(部分案例可降低90%轉染成本)。浙江GMPPEI轉染試劑PEI轉染試劑不含動物源成分,。
產(chǎn)品簡介:Polysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉染效果,,已廣泛應用于工業(yè)化生產(chǎn),。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”體(protonsponge)。PEI可用作轉染試劑,,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞,。有實驗證明,分子量為25000的線性PEI即Polysciences23966(PEI25K)轉染效率表現(xiàn)優(yōu)良,。產(chǎn)品特點:適用于生產(chǎn)mABs,、rAbs、bsABs和病毒載體(AVV,、LV,、BEV);在HEK293,、CHO和Sf9細胞系中高度有效,;適用于從研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的各個階段;可預測,,可大規(guī)模生產(chǎn),;兩周內即可生成大量目標蛋白或病毒,;高轉染效率;大量已發(fā)表的文獻支持,。
PEI在于可以應用于體內試驗,。當初試驗經(jīng)費很有限,被逼無奈只能放棄脂質體2000,,選擇PEI,,以至于相當長的時間內,轉染試驗都不順利,。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書,,所用質粒盡量去內2.轉染時,一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中,,順序不可錯,,輕微混勻,靜止20min3.轉染后4小時,,一定要換液,!換含有FBS的完全培養(yǎng)液!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,,建議把血清濃度適當提高,。PS:事實證明,PEI是可行的,,已經(jīng)做出穩(wěn)定細胞系了,。更多關于PEI轉染試劑相關的信息,可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司,!更多關于Kyfora Bio by Polysciences PEI轉染試劑相關產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉染試劑的主要分子量是多少呢,?
PEI在于可以應用于體內試驗,。當初試驗經(jīng)費很有限,被逼無奈只能放棄脂質體2000,,選擇PEI,,以至于相當長的時間內,,轉染試驗都不順利,。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書,所用質粒盡量去內2.轉染時,,一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中,,順序不可錯,輕微混勻,,靜止20min3.轉染后4小時,,一定要換液,!換含有FBS的完全培養(yǎng)液!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,,建議把血清濃度適當提高,。PS:事實證明,PEI是可行的,,已經(jīng)做出穩(wěn)定細胞系了,。Polysciences轉染與遞送相關產(chǎn)品已正式移交KyforaBio,相關產(chǎn)品標簽將變更為KyforaBiobyPolysciences,,后續(xù)購買請認準備新品牌,。更多關于PEI轉染試劑相關的信息,可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司,!Polysciences PEI轉染試劑中國代理商是哪個,?293細胞PEI轉染試劑說明書
PEI轉染試劑和其他轉染試劑相比有什么優(yōu)勢?MirusPEI轉染試劑優(yōu)化要素
產(chǎn)品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),,是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品,。相比于PEI25K,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙?;?;2.鹽酸鹽形式,具更高的水溶特性,;3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,,其質子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應用領域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉染試劑,,適用于基礎學術研究和藥物研發(fā)早期階段,,以固體粉末形式提供,需用戶自行配置(詳情見使用方法),。歡迎關注曼博生物公眾號:Mine-bioMirusPEI轉染試劑優(yōu)化要素