人間充質(zhì)干細(xì)胞 (MSCs) 的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)可誘導(dǎo)長期轉(zhuǎn)基因表達(dá),,并為多種基因zhi liao應(yīng)用帶來巨大希望。Polybrene是實驗室研究中Zui常用的提高病毒基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的試劑,,但它未被批準(zhǔn)用于人體,,并且還被證明會損害MSCs細(xì)胞的增殖和分化。因此,,優(yōu)化轉(zhuǎn)導(dǎo)方案以應(yīng)用于臨床試驗是非常有必要的,。LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白是可替代的轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑,可以按照現(xiàn)行的GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn),,且很容易應(yīng)用于現(xiàn)有的轉(zhuǎn)導(dǎo)方案,,并且曾被用于人類 CD34+ HSCs細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)研究。聚凝胺(polybrene)是一種陽離子聚合物,1971年研究證明它可提高逆轉(zhuǎn)錄病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,。polybrene的確切作用機制尚不清楚,多認(rèn)為它是通過中和細(xì)胞表面與病毒粒子之間的負(fù)靜電斥力,使病毒粒子容易吸附在細(xì)胞表面,從而促進(jìn)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo),。更多技術(shù)文章歡迎關(guān)注公眾號:Mine-bio慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑是什么試劑呢?提高慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑盒
研究發(fā)現(xiàn) LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白的組合使用可以產(chǎn)生比polybrene更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,,且對細(xì)胞活力或干細(xì)胞特性沒有劑量依賴性的不良影響,。這種轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑的組合dai biao了一種有價值的臨床兼容性polybrene替代方案,具有顯著提高基因zhi liao應(yīng)用中 MSCs 慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的潛力,。細(xì)胞狀態(tài)對于慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率也具有很大的影響,,良好的生長狀態(tài)是達(dá)到高gan ran效率的保證,一般選擇細(xì)胞形態(tài)較好,、輪廓清晰,、處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行g(shù)an ran可提高gan ran效率。更多關(guān)于Sirion Biotech LentiBOOST相關(guān)產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!更多技術(shù)文章歡迎關(guān)注曼博生物公眾號:Mine-bio詳述慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率可以增加慢病毒轉(zhuǎn)染的速度的試劑是什么?
影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的另一個關(guān)鍵參數(shù)是gan ran復(fù)數(shù)(MOI),MOI指的是每個細(xì)胞gan ran的病毒粒子個數(shù),,病毒粒子滴度以gan ran單位(IU)/mL 或 TU/mL表示,。慢病毒的gan ran能力隨細(xì)胞類型的不同而不同,因此每種不同的細(xì)胞類型需要不同的MOI。MOI值越大,,慢病毒gan ran上的可能性也越大,gan ran效率越高,,但對細(xì)胞的毒性也越大,。另外細(xì)胞需要的MOI值越大,也說明細(xì)胞越難被轉(zhuǎn)導(dǎo),。慢病毒gan ran時間也相當(dāng)重要,,gan ran后換液太早會導(dǎo)致gan ran效率下降;gan ran后換液太晚,則對細(xì)胞的損傷太大,,效率也不高,。一般在gan ran后24h換液,如果慢病毒對細(xì)胞產(chǎn)生了明顯的毒性,,可根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)及時提前換液,。更多關(guān)于LentiBOOST慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物,!
慢病毒是一種有包膜的RNA病毒,,直徑為80-120nm,呈二十面體對稱結(jié)構(gòu),、球形,。病毒顆粒Zui外層是包膜(包膜蛋白決定了gan ran細(xì)胞的類型),再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼,,Zui里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶,、整合酶和蛋白酶)。慢病毒gan ran的xian zhu特點是gan ran個體在出現(xiàn)典型的臨床癥狀之前,,大多經(jīng)歷長達(dá)數(shù)年的潛伏期,,之后緩慢發(fā)病,因此這些病原體被稱為慢病毒,。慢病毒載體是指以人類免疫缺陷病毒-1 (HIV-1) 來源的一種病毒載體,,慢病毒載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染,、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息,,是慢病毒載體系統(tǒng)的主要組成部分。慢病毒轉(zhuǎn)染有什么臨床實驗嗎,?
目前的基因&細(xì)胞zhi liao主要采用病毒和非病毒兩種載體形式,。根據(jù)統(tǒng)計,病毒載體約占進(jìn)行臨床實驗的項目 65%,;而慢病毒因無嚴(yán)重的臨床事故出現(xiàn)成為目前相對安全的病毒載體選擇之一,。慢病毒載體具有能gan ran非分裂期細(xì)胞、容納外源性目的基因片段大、穩(wěn)定性強,、免疫原性小等特點,。大量研究表明,相對其他病毒載體,,慢病毒gan ran效率高,,更容易gan ran一些較難gan ran的組織和細(xì)胞,其效率一般可以達(dá)到 30%-95% 以上,。病毒顆的限制性攝取粒往往會降低基因或 shRNA 表達(dá)的成功率,,并要求應(yīng)用更高的病毒滴度。然而,,增加病毒數(shù)量以促進(jìn)表達(dá)可能會導(dǎo)致許多細(xì)胞類型的毒性副作用,,并帶來不必要的昂貴成本。為提供更好的服務(wù),,上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司代理的SIRION Biotech GmbH品牌現(xiàn)已正式變更為Revvity Gene Delivery GmbH,。我司仍將作為Revvity Gene Delivery在中國區(qū)域LentiBOOST產(chǎn)品業(yè)務(wù)的Exclusive Distributor,LentiBOOST在中國市場的營銷和技術(shù)支持工作仍將由上海曼博生物負(fù)責(zé),。什么可以幫助增強慢病毒轉(zhuǎn)染,?創(chuàng)新慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)毒性分析
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