為了達(dá)到研究目的,在轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中加入轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑也能有效提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,。近幾年LentiBOOST作為一種無毒性的化學(xué)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑guang fan引起關(guān)注。LentiBOOST通過與細(xì)胞膜相互作用降低膜黏稠度,提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),,提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,。LentiBOOST是德國Sirion Biotech開發(fā)的一種高效,、無細(xì)胞毒性的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,用于臨床前和臨床的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)。它是一種非離子型,、非受體依賴性的表面活性劑,,通過降低細(xì)胞膜粘稠度、提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),,促進(jìn)慢病毒與細(xì)胞膜的融合,,提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。新合成的逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA整合到宿主DNA中,,稱之為原病毒,。一體化慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)工藝
目前,CAR-T細(xì)胞主要通過病毒載體制備,,大多數(shù)情況下由慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒做載體,。慢病毒載體(LVs)由于其有效的將基因整合進(jìn)靶細(xì)胞基因組,穩(wěn)定的基因表達(dá)等特點(diǎn),,被認(rèn)為是Zui有希望的基因zhi liao載體,。與其他病毒載體相比,慢病毒載體的整合模式具有更低的致Ai風(fēng)險(xiǎn),,以及隨機(jī)整合基因風(fēng)險(xiǎn)低,,因此,用慢病毒載體生產(chǎn)CAR-T細(xì)胞更加安全有效,,而且靈活,。更重要的是慢病毒相較于其他病毒載體,生產(chǎn)成本相對較低,。另外,,慢病毒載體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)分化細(xì)胞,也可以轉(zhuǎn)導(dǎo)分化細(xì)胞,,因此,,慢病毒載體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)更為guang fan的細(xì)胞,包括那些難轉(zhuǎn)導(dǎo)的血液前體細(xì)胞,,神經(jīng)細(xì)胞,,淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。HSC細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)什么試劑可以增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率?
研究發(fā)現(xiàn) LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白的組合使用可以產(chǎn)生比polybrene更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,,且對細(xì)胞活力或干細(xì)胞特性沒有劑量依賴性的不良影響,。這種轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑的組合dai biao了一種有價(jià)值的臨床兼容性polybrene替代方案,具有顯著提高基因zhi liao應(yīng)用中 MSCs 慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的潛力,。細(xì)胞狀態(tài)對于慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率也具有很大的影響,,良好的生長狀態(tài)是達(dá)到高gan ran效率的保證,一般選擇細(xì)胞形態(tài)較好,、輪廓清晰,、處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行g(shù)an ran可提高gan ran效率,。更多關(guān)于Sirion Biotech LentiBOOST相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物,!更多技術(shù)文章歡迎關(guān)注曼博生物公眾號:Mine-bio
人間充質(zhì)干細(xì)胞 (MSCs) 的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)可誘導(dǎo)長期轉(zhuǎn)基因表達(dá),,并為多種基因zhi liao應(yīng)用帶來巨大希望。Polybrene是實(shí)驗(yàn)室研究中Zui常用的提高病毒基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的試劑,,但它未被批準(zhǔn)用于人體,,并且還被證明會損害MSCs細(xì)胞的增殖和分化。因此,,優(yōu)化轉(zhuǎn)導(dǎo)方案以應(yīng)用于臨床試驗(yàn)是非常有必要的,。LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白是可替代的轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,可以按照現(xiàn)行的GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn),,且很容易應(yīng)用于現(xiàn)有的轉(zhuǎn)導(dǎo)方案,,并且曾被用于人類 CD34+ HSCs細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)研究。聚凝胺(polybrene)是一種陽離子聚合物,1971年研究證明它可提高逆轉(zhuǎn)錄病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,。polybrene的確切作用機(jī)制尚不清楚,多認(rèn)為它是通過中和細(xì)胞表面與病毒粒子之間的負(fù)靜電斥力,使病毒粒子容易吸附在細(xì)胞表面,從而促進(jìn)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo),。更多技術(shù)文章歡迎關(guān)注公眾號:Mine-bio慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)有限制條件嗎?
近幾年LentiBOOST作為一種無毒性的化學(xué)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑guang fan引起關(guān)注,。LentiBOOST通過與細(xì)胞膜相互作用降低膜黏稠度,提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,。研究證實(shí)LentiBOOST在不影響轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞存活,、增殖及分化能力的前提下,提高小鼠T細(xì)胞,、HSCs和人HSCs的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,。在異種移植后免疫缺陷小鼠體內(nèi),LentiBOOST使再植HSCs的VCN增加2倍,,且對細(xì)胞分化和植入無影響,。LentiBOOST在對人T細(xì)胞無細(xì)胞毒作用的情況下可增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生更多的Zhong Liu抗原特異性TCR-T細(xì)胞,且轉(zhuǎn)導(dǎo)后的 T細(xì)胞仍能分泌TNF及IFN-γ,,并對抗原陽性的腫瘤細(xì)胞具有明顯的細(xì)胞毒作用,,這一發(fā)現(xiàn)為ai zheng的基因zhi liao提供新的優(yōu)化策略。更多關(guān)于LentiBOOST慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑相關(guān)產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!用什么試劑可以做慢病毒轉(zhuǎn)染呢?T細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)生產(chǎn)系統(tǒng)
什么是慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,?一體化慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)工藝
慢病毒載體是指以人類免疫缺陷病毒-1(HIV-1)來源的一種病毒載體,,慢病毒載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染,、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息,,是慢病毒載體系統(tǒng)的主要組成部分,。攜帶有外源基因的慢病毒載體在慢病毒包裝質(zhì)粒、細(xì)胞系的輔助下,,經(jīng)過病毒包裝成為有g(shù)anran力的病毒顆粒,,通過ganran細(xì)胞或huoti組織,實(shí)現(xiàn)外源基因在細(xì)胞或huoti組織中表達(dá),。慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達(dá)載體和慢病毒包裝載體組成,。而慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的慢病毒載體所需要的所有輔助蛋白,。更多關(guān)于LentiBOOST慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的相關(guān)產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!一體化慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)工藝