化學(xué)方法比物理方法改,。聯(lián)度高,,且能獲得均勻一致的交聯(lián),對調(diào)節(jié),、控制膠原的各性質(zhì)均有效,。已廣泛應(yīng)用于各種化學(xué)試劑交聯(lián)膠原,以提高其交聯(lián)度,、力學(xué)性能及生物相容性,?;瘜W(xué)改性法具體又可分為使用化學(xué)試劑交聯(lián),、側(cè)鏈的修飾、生理活性物的固定化三種方法,。[130]化學(xué)試劑交聯(lián)法中常用的化學(xué)交聯(lián)劑有戊二醛,、己異二氰酸酯、碳化二亞胺,、疊氮二苯基磷等,,其中戊二醛是應(yīng)用較比較廣的試劑,大量實(shí)驗(yàn)證明:戊二醛能提供有效交聯(lián),,但有細(xì)胞毒性,,且其用量難以控制。另外,隨著交聯(lián)度的增加,,吸水能力和膨脹度卻會(huì)降低,。酰基疊氮化物,、聚環(huán)氧化物或京尼平交聯(lián)等,,不會(huì)引入明顯的毒性,且可獲得理想的交聯(lián)效果,。所見報(bào)道中,,多使用單一交聯(lián)劑對膠原蛋白交聯(lián)改性,但也有使用混合交聯(lián)劑的,,如為了解決人工心臟瓣膜晚期鈣化問題,,篩選出環(huán)氧丙烷化學(xué)改性戊二醛處理生物瓣的方法,可明顯減低瓣膜組織膠原蛋白末端游離羧基含量,。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,,經(jīng)改性后的瓣膜組織能保持較好的組織穩(wěn)定性和機(jī)械抗張強(qiáng)度、免疫原性測試為陰性,,符合臨床應(yīng)用,。 真皮中含有豐滿的膠原蛋白層,而補(bǔ)充膠原三肽,,能更有效的將皮膚細(xì)胞撐起,。廣東海鯛魚膠原蛋白
在實(shí)際提取過程中,不同提取方法之間往往相互結(jié)合,,可以得到較好的提取效果,。采用超高壓處理系統(tǒng)對原料給予高壓處理一段時(shí)間,使其組織結(jié)構(gòu)和膠原蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)生松弛,、變性,,便于分離提取。熱水提取法是將原料經(jīng)過除雜蛋白等前處理之后,,在一定條件下直接用熱水浸提已經(jīng)變性了的膠原蛋白或膠原蛋白水解物,,使用的溫度有100℃沸水浴、60-70℃,、40-45℃,。膠原蛋白的提取一般有三種方法:一是高壓輔助的物理方法;二是用溶劑預(yù)處理結(jié)合低溫或熱水抽提的化學(xué)方法,,根據(jù)溶劑的不同,,可分為熱水浸提法、酸法,、堿法,、鹽法,;三是用酶的生物化學(xué)法。一般來說,,高壓輔助和熱水抽提針對明膠的提取,,而低溫抽提和酶法針對膠原的提取,但其基本原理都是根據(jù)膠原蛋白的特性改變蛋白質(zhì)所在的外界環(huán)境,,把膠原蛋白從其他蛋白質(zhì)中分離出來,。 遼寧膠原蛋白肽廠家膠原三肽更能有效的服務(wù)于人類的健康與美麗。
有人對海參膠原研究發(fā)現(xiàn),,刺參體壁含蛋白,,其中70%為膠原蛋白。氨基酸分析,,膠原富含丙氨酸和羥脯氨酸,,但羥賴氨酸含量較少,SDS電泳及SP凝膠柱分析發(fā)現(xiàn)其膠原組成為(α1)2α2,。還有人從仿刺參()提取膠原蛋白,,利用EDTA和Tris-HCl浸泡溶漲,用氫氧化鈉除去雜質(zhì)和非膠原蛋白,,采用胃蛋白酶促溶提取粗制膠原,,通過鹽析和透析獲取精致膠原蛋白,并進(jìn)一步利用SephacrylS-300HR凝膠過濾和DEAE-52陰離子交換除去多糖,,獲取膠原蛋白純品,。SDS-PAGE電泳表明膠原分子的組成為(α1)3,且α鏈類似于脊椎動(dòng)物Ⅰ型膠原的α1鏈,,熱收縮溫度為57℃,,低于牛皮膠原5℃。還有人對采自日本Senzaki海灣的Stomolopusmeleagri水母的外傘組織進(jìn)行了分析,。整個(gè)中膠層被分成三部分,,利用醋酸首先將凍干的水母中膠層分為酸溶性蛋白和酸不溶性物質(zhì),利用NaCl溶液將酸溶性蛋白分為酸溶性膠原蛋白和酸溶性非膠原蛋白,,而不溶入醋酸的中膠層經(jīng)胃蛋白酶處理后大多變?yōu)榭扇苄缘哪z原質(zhì),。然后利用氨基酸分析儀對分離得到的三部分的組成分別進(jìn)行分析。發(fā)現(xiàn)該水母外傘中膠原蛋白含量很高,,大約占干重的,。經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析其膠原蛋白是由三個(gè)獨(dú)特α鏈組成。
堿法提取即利用一定濃度的堿在一定的外界條件下提取膠原蛋白,,堿處理法中常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉,、碳酸鈉等,,用氫氧化鈉浸提時(shí)效果較好。一般的是把樣品勻漿后,用堿溶液多次溶脹后,,再離心提取,。但由于易引起蛋白質(zhì)變性,如膠原肽鍵水解,,含羥基,、疏基的氨基酸全部被破壞;所得產(chǎn)物等電點(diǎn)pH值較低,,天冬酞胺和谷氨酞胺分別轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼岷凸劝彼?,得到的水解產(chǎn)物分子量較在酸性溶液中比低等問題,若比較嚴(yán)重的話,,還會(huì)產(chǎn)生D,、L-型氨基酸消旋混合物,若D型氨基酸含量高過L型氨基酸,,則會(huì)抑制L-型氨基酸的吸收,,有些D型氨基酸有毒,甚至有致ai,、致畸和致突變的作用,。而且堿法提取的含量較低,用氫氧化鈉從魷魚皮中提取堿溶性膠原蛋白,,其得率只有3%(以濕基計(jì)),。所以,若想提取結(jié)構(gòu)完整,、使用安全的膠原蛋白,,很少采用此方法。有關(guān)單獨(dú)采用堿法提取膠原蛋白的報(bào)道不多,,一般是堿法提取和酸法提法結(jié)合使用,。比如在4℃條件下,魚骨用,,再用,,用10%的異丙醇溶液去除脂肪,,,現(xiàn)在得到無色無味的膠原蛋白,,提取率為。 所以是各國女性較為認(rèn)可的魚類膠原蛋白,。
膠原蛋白亦可用于食品,,早在十二世紀(jì)Bingen的,在相當(dāng)長的一段時(shí)間里,,含膠原的一些產(chǎn)品被人們認(rèn)為對關(guān)節(jié)是很有益處的,。因?yàn)樗哂羞m用于食品的一些屬性:食用級(jí)通常外觀為白色,,口感柔和,味道清淡,,易消化,。可以降低血甘油三酯和膽固醇,,并可以增高體內(nèi)某些缺乏的必需微量元素使之維持在一個(gè)相對的正常范圍之內(nèi),,它是一種理想的降血脂食品。此外,,有研究表明,,膠原蛋白可以協(xié)助排除體內(nèi)的鋁,減少鋁在體內(nèi)的聚集,,降低鋁質(zhì)對人體的危害,,并一定程度上促進(jìn)指甲和頭發(fā)的生長。Ⅱ型膠原是關(guān)節(jié)軟骨中的主要蛋白,,因而是潛在的自身抗原,。口服后能誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生免疫耐受,,從而抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病,。膠原多肽是膠原或明膠經(jīng)蛋白酶等降解處理后制得的具有較高消化吸收性、分子量約為2000~30000的產(chǎn)物,,不具有明膠的凝膠性能,,市場上銷售的膠原多為膠原多肽。 膠原三肽的用途化妝品中的作用保濕,、滋養(yǎng),、亮膚、緊膚,、防皺,、修復(fù)。廣東深海鱈魚膠原蛋白肽原液
需要的膠原蛋白,,其實(shí)是一種由3個(gè)氨基酸分子組成的膠原蛋白即“膠原三肽”,。廣東海鯛魚膠原蛋白
酶法提取是指可溶性膠原和酸溶性膠原被提取后,需用一些蛋白酶,,如膠原酶,、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶等水解,,得到不同的酶促溶性膠原蛋白,。所使用的蛋白酶主要分3種:動(dòng)物蛋白酶(如胰蛋白酶,胃蛋白酶),,植物蛋白酶(如木瓜蛋白酶,,菠蘿蛋白酶),,微生物蛋白酶(如堿性蛋白酶,,中性蛋白酶),。在對酶法水解膠原蛋白的研究中,以堿性蛋白酶應(yīng)用較多,。將膠原進(jìn)行限制性降解,,即將末端肽切割下來,由于膠原肽鏈間的共價(jià)鍵都是通過分子末端肽里的賴氨酸或羥賴氨酸的相互作用形成的,,末端肽被切下后,,含三螺旋結(jié)構(gòu)的主體部分可溶于稀有機(jī)酸而被提取出來。用酶處理,,可以水解掉膠原纖維蛋白的末端肽,,提高膠原蛋白的產(chǎn)率;而且還不會(huì)破壞膠原蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu),,保持其特性,。影響酶提取的因素有很多,如酶濃度,、酶與底物的比例,、酶解時(shí)間、酶解溫度,、pH值以及料液比等,。在實(shí)際操作中,大多數(shù)采用酶復(fù)合法提取膠原蛋白,,較多的是使用胃蛋白酶提取,,有機(jī)酸多為乙酸。 廣東海鯛魚膠原蛋白
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