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D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-11-03

    因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,,并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān)。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),,生成氧化熒光素(oxyluciferin),并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的,,約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身。熒光素的半衰期約三個(gè)小時(shí),,只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶,。(1)熒光素不會影響動物的正常生理功能。(2)熒光素是280道爾頓的小分子,,水溶性和脂溶性都非常好,,很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。(3)熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快,,可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動物體內(nèi),。腹腔注射擴(kuò)散較慢,持續(xù)發(fā)光長,。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光,,10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的更高點(diǎn),在更高點(diǎn)持續(xù)約20~30min后開始衰減,,約3h后熒光素排除,,發(fā)光全部消失,更佳檢測時(shí)間是在注射后15~35min之間,;若進(jìn)行熒光素靜脈注射,,擴(kuò)散快,但發(fā)光持續(xù)時(shí)間很短??蒲腥藛T根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg,,即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素。(4)觀察時(shí)間的間隔沒有更短限制,,只要觀察的條件控制一致就可以,。雖然底物在動物體內(nèi)有一定的代謝過程。D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長是多長,?D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學(xué),,例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測,。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理,,并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,,現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法,。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力,,尤其是在高通量應(yīng)用中,。該檢測原理還促進(jìn)了其它ATP檢測平臺的誕生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測系統(tǒng),。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,,還可以檢測底物(luciferin)濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),,能對這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測,,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,,一種改進(jìn)的luciferin面世,,能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin,。常州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存D-熒光素鉀鹽的測試方法有哪幾種,?

    常見的熒光素酶有兩種,分別是螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase,,編碼基因是luc)和海腎熒光素酶(Renillaluciferase,,編碼基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,,后者的底物是Coelenterazine,。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,底物被氧化發(fā)光(不同底物光的顏色和波長不同),,當(dāng)?shù)孜镞^量時(shí),產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。***成像技術(shù)(opticalinvivoimaging)目前主要采用生物發(fā)光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術(shù),,生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化學(xué)發(fā)光的原理,,將體外能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株植入動物體內(nèi),與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng),,利用光學(xué)系統(tǒng)檢測光強(qiáng)度,,間接反映出細(xì)胞數(shù)量的變化或細(xì)胞的定位。這項(xiàng)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域常用的有**或疾病動物模型的建立,,并可用于病毒學(xué)研究,、siRNA研究、干細(xì)胞研究,、蛋白質(zhì)相互作用研究等,。以下主要介紹D-Luciferin(D熒光素)的分類:D-Luciferin:有三種,分別是D-Luciferin,SodiumSalt/D熒光素鈉鹽,、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素,。

    故根據(jù)熒光反應(yīng)的情況可以檢測樣品中的微生物含量。APT熒光檢測儀***用于食品,、飲用水,、餐飲器具等的微生物快速檢測。1970年,,科學(xué)家***次測定了螢火蟲熒光素酶的結(jié)構(gòu),;1985年,科學(xué)家***克隆了一種螢火蟲熒光素酶基因,,并在大腸桿菌中表達(dá),,從而得到了具有活性的熒光素酶;1986年,,科學(xué)家們測定了該種螢火蟲熒光素酶的基因序列,。隨后,各種螢火蟲熒光素酶基因相繼克隆成功,,熒光素酶的研究和應(yīng)用不斷發(fā)展,。目前,熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用到醫(yī)學(xué),、生命科學(xué),、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)等許多領(lǐng)域,。以醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?yàn)槔?*們將熒光素酶基因嵌入到*細(xì)胞中,,再注入熒光素,使*細(xì)胞發(fā)光,,通過探測熒光,,就能監(jiān)測*細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。同理,用這種方法能對致病基因,、***免疫機(jī)制等進(jìn)行研究,,對某些疾病進(jìn)行診斷,監(jiān)測疫苗,、藥物和治療方法的效力,。D-熒光素鉀鹽使用濃度怎么樣?

    產(chǎn)品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,,普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,,特別是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光,。當(dāng)熒光素過量時(shí),產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見下圖),。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,,構(gòu)建原位**模型,之后注入熒光素底物,,通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強(qiáng)度變化,,從而實(shí)時(shí)監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評價(jià)等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響,,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征,。注:在抗**藥物藥效評價(jià)試驗(yàn)中,由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定**大小,,受**生長所發(fā)生的**內(nèi)部壞死影響,,生物自發(fā)光并不能很***的評價(jià)**生長,在抗**藥效評價(jià)有較高要求的實(shí)驗(yàn)中,,建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測**生長,。D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析,;報(bào)告基因分析,;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),,D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽),。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,??扇苡诩状己虳MSO。 D-熒光素鉀鹽測試需要滿足哪些條件,?D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

D-熒光素有時(shí)候也叫游離酸,。D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    包括熒光素酶和ATP水平分析,;報(bào)告基因分析;高通量測序和各種污染檢測,。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),,D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽),。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液??扇苡诩状己虳MSO,;后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,,溶劑無毒性,,特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別,。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件:4℃冰袋運(yùn)輸;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,,配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),,混勻。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,,37℃孵育5-10min,,然后進(jìn)行圖像分析。2.活題成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌,。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,。3)腹腔注射(.),。D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

南京翌科生物科技有限公司是一家有著先進(jìn)的發(fā)展理念,先進(jìn)的管理經(jīng)驗(yàn),,在發(fā)展過程中不斷完善自己,,要求自己,,不斷創(chuàng)新,時(shí)刻準(zhǔn)備著迎接更多挑戰(zhàn)的活力公司,,在江蘇省等地區(qū)的商務(wù)服務(wù)中匯聚了大量的人脈以及**,,在業(yè)界也收獲了很多良好的評價(jià),這些都源自于自身不努力和大家共同進(jìn)步的結(jié)果,,這些評價(jià)對我們而言是比較好的前進(jìn)動力,,也促使我們在以后的道路上保持奮發(fā)圖強(qiáng)、一往無前的進(jìn)取創(chuàng)新精神,,努力把公司發(fā)展戰(zhàn)略推向一個(gè)新高度,,在全體員工共同努力之下,全力拼搏將共同南京翌科生物科技供應(yīng)和您一起攜手走向更好的未來,,創(chuàng)造更有價(jià)值的產(chǎn)品,,我們將以更好的狀態(tài),更認(rèn)真的態(tài)度,,更飽滿的精力去創(chuàng)造,,去拼搏,去努力,,讓我們一起更好更快的成長,!