并配合手工使細(xì)胞從4℃,-20℃,,-80℃到液氮中逐步轉(zhuǎn)移使其達(dá)到“慢凍”的效果,。但這種自制的凍存液儲(chǔ)存時(shí)間一般比較短,不能滿足時(shí)間跨度大的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的需求,。且這樣人力和時(shí)間成本大,,人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來了不穩(wěn)定性。無血清即用型凍存液順應(yīng)科技發(fā)展應(yīng)運(yùn)而生,,西寶生物經(jīng)銷多種日本進(jìn)口wako品牌,、適合不同細(xì)胞的無血清細(xì)胞凍存液,可以滿足多層次的實(shí)驗(yàn)需求,,并給實(shí)驗(yàn)帶來簡便,、可靠、高效的新體驗(yàn),,品種齊全,,質(zhì)量保證。訂購熱線:,!BAMBANKER?無血清細(xì)胞凍存液BAMBANKER是一種日本原裝進(jìn)口含DMSO的無血清細(xì)胞凍存液,,均無不明動(dòng)物源成分,高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為實(shí)驗(yàn)效果帶來...
用吸管吸出細(xì)胞懸液,,加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液,,混勻;離心,,1000rpm,,5min,;棄去上清液,加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,,計(jì)數(shù),,調(diào)整細(xì)胞密度,接種培養(yǎng)瓶,,37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),;次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),。注意事項(xiàng):取錯(cuò)細(xì)胞:拿錯(cuò)凍存管,。(快快快,匆忙之中,,難免出錯(cuò),,況且-170多度,凍手?。┙鉀Q:(1)核查記錄冊及凍存管上細(xì)胞的名稱,、時(shí)間是否一致。(2)拿細(xì)胞時(shí)戴手套,!2.水浴時(shí)間太長:2min還沒融化,。(凍存管的壁較厚,隔熱)解決:(1)適當(dāng)提高水浴溫度(37度-40度),。(2)要是冬天,,就選用保溫盒。3.冰盒內(nèi)時(shí)間太長:復(fù)蘇1h后,,還沒有加入新的培養(yǎng)液,。(高濃度...
本發(fā)明的目的在于提供一種細(xì)胞凍存液,使凍存培養(yǎng)后的細(xì)胞具有成活率高的優(yōu)點(diǎn),,同時(shí)滿足凍存液成分簡單,、成本低等要求。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)上述目的,。***方面,,本發(fā)明提供了一種細(xì)胞凍存液,所述細(xì)胞凍存液的成分如下:將上述組分加入到工業(yè)用水中,,用于配置得到細(xì)胞凍存液,。該細(xì)胞凍存液采用聯(lián)合滲透性和非滲透性保護(hù)液組合方案,細(xì)胞凍存液在完全凝固之前,,滲透到細(xì)胞內(nèi),,在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度,降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,從而保護(hù)細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷,,同時(shí)細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過分外滲,,避免細(xì)胞過分脫水皺縮。第二方面,,本發(fā)明提供了一種細(xì)胞凍存液的使用方法,,所述方法包括如下步驟:1...
這一過程需要在15min之內(nèi)完成,同時(shí)需要不斷進(jìn)行混合,,使得細(xì)胞凍存液能夠在細(xì)胞懸液中均勻分布,。隨后,,將充分混勻的細(xì)胞溶液分裝至,,進(jìn)行程序性降溫至-80℃后轉(zhuǎn)至液氮中儲(chǔ)存。從液氮系統(tǒng)中取出凍存的充質(zhì)干細(xì)胞樣品,,等待1~2min使殘余液氮揮發(fā)之后,,迅速放入37℃水浴中,待可見冰塊剛好要消失至黃豆大小體積時(shí),,取出細(xì)胞樣品計(jì)算細(xì)胞存活率,。細(xì)胞存活率結(jié)果如表1所示。實(shí)施例4nk細(xì)胞的凍存采用實(shí)施例1所述細(xì)胞凍存液,,在凍存前24小時(shí),,將該凍存液置于2-8℃進(jìn)行溫度平衡,以nk細(xì)胞為例制備細(xì)胞懸液,,取800ul細(xì)胞懸液,,按按細(xì)胞懸液(v):細(xì)胞凍存液(v)=4:1計(jì)算加入細(xì)胞凍存液的體積200ul...
DMSO)、甘油,、乙二醇,、丙二醇、甲醇,、乙醇,、丙醇、和甲酰胺等,。這類保護(hù)劑能夠在細(xì)胞冷凍懸液完全凝固之前,,穿過細(xì)胞膜滲透到細(xì)胞內(nèi),在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度,,降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,,從而保護(hù)細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷。同時(shí),,細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過分外滲,,避免了細(xì)胞過分脫水皺縮。非滲透性冷凍保護(hù)劑一般是些大分子物質(zhì),不能滲透到細(xì)胞內(nèi),。該類保護(hù)劑主要包括聚yi烯吡ge烷酮,、蔗糖、聚乙二醇,、葡聚糖,、白蛋白及***等。其保護(hù)機(jī)制的假設(shè)很多,,其中一種可能是,,聚yi烯吡ge烷酮等大分子物質(zhì)可以優(yōu)先同溶液中的水分子相結(jié)合,降低溶液中自由水的含量,。使冰點(diǎn)降低,。減少冰晶的形成;同時(shí),,由于其分...
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保種非常常用的一種辦法,,在細(xì)胞凍存中有很多非常關(guān)鍵的因素,其中細(xì)胞凍存液是細(xì)胞凍存**關(guān)鍵的要素之一,,是細(xì)胞凍存所必須的物質(zhì),。細(xì)胞凍存的作用不僅*是說只是用來進(jìn)行細(xì)胞的保存,還可以進(jìn)行售賣,、運(yùn)輸?shù)仁马?xiàng),,所以說選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要。無血清細(xì)胞凍存液作為細(xì)胞凍存液的一種,,那么無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)點(diǎn)有哪些呢,?很多所使用的傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液的成份主要是:新鮮的培養(yǎng)基,其中含有10%的胎牛血清和5-10%的DMSO,。凍存的方法:將冷凍管置于4℃條件喜愛10分鐘,,接著在-20℃的條件下30分鐘,-80℃的條件下保存16-18個(gè)小時(shí)(或隔夜保存也可以),,**后再液氮的環(huán)境中進(jìn)...
凍存成功的兩大必要條件細(xì)胞的生長狀態(tài)按照標(biāo)準(zhǔn)凍存程序操作為什凍存細(xì)胞需要加入保護(hù)劑在不附加任何保護(hù)劑下直接凍存細(xì)胞時(shí),,細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶,能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷,、電解質(zhì)升高,、滲透壓改變、脫水,、PH改變,、蛋白變性等,能引起細(xì)胞死亡,。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑,,可使冰點(diǎn)降低,。在緩慢的凍結(jié)條件下,能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞,。貯存在負(fù)130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成,。實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備凍存管、15毫升離心管,、移液管,、移液槍、qiang頭等放入無菌超凈工作臺(tái),,以紫外線照射30分鐘,。采用通風(fēng)機(jī)通風(fēng)3分鐘。以75%酒精擦拭操作臺(tái)和雙手,。準(zhǔn)備好冰盒,。將離心機(jī)調(diào)節(jié)至800轉(zhuǎn),3分鐘,。水浴箱調(diào)節(jié)...
提高細(xì)胞膜對水的通透性,,且對細(xì)胞無明顯毒性,。慢速冷凍方法又可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,,減少胞內(nèi)形成冰結(jié)晶的機(jī)會(huì),從而減少冰晶對細(xì)胞的損傷,。對于一些原代細(xì)胞(皮膚細(xì)胞),,除滲透型保護(hù)劑外,還會(huì)適當(dāng)添加表面型保護(hù)劑(海藻糖),,以提高細(xì)胞存活率,。所需材料?超低溫冰箱或液氮罐??20%以上血清的完全培養(yǎng)液或血清?DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(121℃蒸氣高壓消毒)?2ml**細(xì)胞凍存管?吸管、離心管,、噴燈,、凍存管架貼壁細(xì)胞的凍存1.選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,在凍存前*****好換液,。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉,,用胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶,,加入等量完全培養(yǎng)基終止消化,。用吸管吸取培養(yǎng)...
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保種非常常用的一種辦法,在細(xì)胞凍存中有很多非常關(guān)鍵的因素,,其中細(xì)胞凍存液是細(xì)胞凍存**關(guān)鍵的要素之一,,是細(xì)胞凍存所必須的物質(zhì)。細(xì)胞凍存的作用不僅*是說只是用來進(jìn)行細(xì)胞的保存,,還可以進(jìn)行售賣,、運(yùn)輸?shù)仁马?xiàng),所以說選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要。無血清細(xì)胞凍存液作為細(xì)胞凍存液的一種,,那么無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)點(diǎn)有哪些呢,?很多所使用的傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液的成份主要是:新鮮的培養(yǎng)基,其中含有10%的胎牛血清和5-10%的DMSO,。凍存的方法:將冷凍管置于4℃條件喜愛10分鐘,,接著在-20℃的條件下30分鐘,-80℃的條件下保存16-18個(gè)小時(shí)(或隔夜保存也可以),,**后再液氮的環(huán)境中進(jìn)...
在細(xì)胞培養(yǎng)中,,細(xì)胞凍存是**關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一,尤其在細(xì)胞***,、細(xì)胞存儲(chǔ)中對細(xì)胞凍存更有特殊要求,,下面就根據(jù)降溫速度以及凍存液組分對細(xì)胞凍存做詳細(xì)介紹。根據(jù)降溫速度區(qū)分,,細(xì)胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存,。根據(jù)凍存方式不同可以分為慢速凍存(程序降溫法)與快速凍存(非程序降溫法)。程序降溫凍存技術(shù)要點(diǎn)是慢凍,,標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2/℃min,;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min,。之前,,常用的傳統(tǒng)方法是將凍存管置于4℃30分鐘--->-20℃60分鐘--->-80℃過夜--->液氮罐。不過,,由于步驟較多,,間隔時(shí)間又長,很容易遺忘,。之后,,人們也開始使用程序...
在細(xì)胞體外培養(yǎng)工作中,為了達(dá)到長期保存細(xì)胞的生物活性的目的,,須將細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存,,并在實(shí)驗(yàn)需要的時(shí)候?qū)⑵渲匦聫?fù)蘇和培養(yǎng)。目前,,細(xì)胞凍存**常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,,主要采用添加適量保護(hù)劑使細(xì)胞緩慢降溫至指定溫度范圍,從而到達(dá)保護(hù)細(xì)胞的目的,。EKBIOTech無血清細(xì)胞凍存液是EKBIO技術(shù)團(tuán)隊(duì)在長期的細(xì)胞研究過程中針對細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇不斷優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,,面向數(shù)百種細(xì)胞研發(fā)出的**凍存液產(chǎn)品。該產(chǎn)品添加了細(xì)胞沉降穩(wěn)定劑,,可延緩細(xì)胞在凍存過程中的沉降速率,,防止細(xì)胞互相擠壓,,影響細(xì)胞凍存效果。另外,,添加了細(xì)胞膜保護(hù)劑,、滲透性細(xì)胞膜內(nèi)保護(hù)劑、非滲透性細(xì)胞保護(hù)劑等多種冷凍保護(hù)劑,,這些成分在溶液中...
分析純)或無色新鮮甘油步驟(一)細(xì)胞凍存1.配制含10%DMSO或甘油,、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;2.取對數(shù)生長期的細(xì)胞,,去除舊培養(yǎng)液,,用PBS清洗。3.去除PBS,,加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長的細(xì)胞消化下來,;4.離心1000rpm,5min,;5.去除胰蛋白酶,,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,,計(jì)數(shù),,調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的**終密度為5×106/ml~1×107/ml;6.將細(xì)胞分裝入凍存管中,,每管1~ml,;7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,,凍存時(shí)間及操作者,;8.凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),,可增至-5℃...
本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域:,,尤其涉及一種細(xì)胞凍存液,具體涉及一種用于干細(xì)胞的凍存液,。背景技術(shù)::臍帶血是胎兒娩出,、臍帶結(jié)扎并離斷后殘留在胎盤和臍帶中的血液,通常是廢棄不用的,。近十幾年的研究發(fā)現(xiàn),,臍帶血中含有可以重建人體造血和免疫系統(tǒng)的造血干細(xì)胞,可用于造血干細(xì)胞移植,,***80多種疾病,。因此,臍帶血已成為造血干細(xì)胞的重要來源,,特別是無血緣關(guān)系造血干細(xì)胞的來源,。也是一種非常重要的人類生物資源,。干細(xì)胞***是將具有不斷自我繁殖能力和多向化潛能的干細(xì)胞在體外培養(yǎng)后,再將其移植入患者受損或缺損組織中,,從而實(shí)現(xiàn)對損傷組織的補(bǔ)充和修復(fù),。目前干細(xì)胞采集后,需要加入保存液進(jìn)行冷凍保存,,細(xì)胞凍存液是細(xì)...
去除舊培養(yǎng)液,,用PBS清洗1-2次;去掉培養(yǎng)瓶里的殘余血清,;3,、加入適量胰酶(濃度一般為),使胰酶覆蓋整個(gè)瓶,,放入培養(yǎng)箱消化,;4、細(xì)胞消化(具體時(shí)間根據(jù)鏡下形態(tài)判斷),,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,細(xì)胞胞質(zhì)回縮,細(xì)胞間不再連接成片,,此時(shí)加入完全培養(yǎng)基終止消化,;5、用巴氏吸管輕輕吹打細(xì)胞,,形成細(xì)胞懸液,,將細(xì)胞懸液1000r/min左右條件下離心3-5min;6,、棄上清,,加入適量預(yù)先配制好的凍存液,巴氏吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,,計(jì)數(shù),,調(diào)節(jié)凍存液中的細(xì)胞更終密度為5×106/ml~1×107/ml;7,、將細(xì)胞分裝入凍存管中,,每管;8,、凍存管標(biāo)記細(xì)胞名稱,,凍存時(shí)間,操作者及細(xì)胞代數(shù)信息,。對于懸浮細(xì)胞凍存,,則...
無血清細(xì)胞凍存液,含多種保護(hù)劑成分,。一些保護(hù)劑,,易于穿透細(xì)胞,,避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞,,但可以在冰晶形成之前,,優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度,,減少陽離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量,,為多種保護(hù)劑組合,在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù),,**提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率,。無血清細(xì)胞凍存液不含牛血清,無動(dòng)物源組份,。2-8℃即可穩(wěn)定保存,,無需冷凍,即取即用,。凍存細(xì)胞,,無需程序降溫。凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上,。1.無血清細(xì)胞凍存液用于造血干細(xì)胞,、間充質(zhì)干細(xì)胞等干細(xì)胞的儲(chǔ)存。2.無血清細(xì)胞凍存液用于T淋巴細(xì)胞,、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存儲(chǔ),。3.無血清細(xì)胞凍存液用于其他類型哺...
所以非程序降溫凍存方法便應(yīng)運(yùn)而生,它能極大簡化凍存流程,,細(xì)胞可直接置于-80°C冰箱完成凍存過程,,更為簡便高效。03細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的比較好時(shí)間細(xì)胞在體外生長期間,,通常分為三個(gè)階段:潛伏期,、指數(shù)生長期和平臺(tái)期。潛伏期通常是細(xì)胞剛剛傳代,,此時(shí)細(xì)胞開始貼附基質(zhì)和伸展骨架,代謝活動(dòng)集中在粘附蛋白和骨架蛋白的表達(dá),,細(xì)胞數(shù)量在這段時(shí)間內(nèi)幾乎沒有增加,。隨后,細(xì)胞開始指數(shù)生長期,,轉(zhuǎn)錄翻譯過程旺盛,,胞內(nèi)物質(zhì)、信號傳遞迅速,,細(xì)胞數(shù)量迅速增長,。如果在這個(gè)時(shí)期凍存,,實(shí)際上是強(qiáng)行將細(xì)胞凍結(jié)在代謝的某一時(shí)刻,勢必造成對解旋的DNA,、轉(zhuǎn)錄翻譯中的RNA和蛋白的機(jī)械損傷,,增加個(gè)別環(huán)節(jié)發(fā)生錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)。隨著細(xì)胞數(shù)量的增長...
隔夜取出凍存管直接放液氮凍存,?;蛑苯硬捎贸绦蛐越禍睾懈鼮榉奖恪W髡撸悍?*研究僧鏈接:zhuanlan./p/來源:知乎著作權(quán)歸作者所有,。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán),,非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處。1,、細(xì)胞活力及濃度細(xì)胞應(yīng)在生長良好,、致密度約為80-90%、數(shù)目一般為106-107/ml,,活力達(dá)90%以上的狀態(tài)下凍存,。細(xì)胞活力差的細(xì)胞在凍存后的成活率很小,因此,,一定要在細(xì)胞旺盛分裂時(shí)期凍存,。2、注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)DMSO應(yīng)為試劑級等級,,無菌且無色,,可以用微米濾膜過濾,或者直接購買無菌產(chǎn)品,。以5-10ml小體積分裝,,4℃避光保存,勿作多次解凍,。使用DMSO前,,不需要進(jìn)行高壓滅菌,它本身就有滅菌的...
常須將培養(yǎng)物進(jìn)行冷凍保存,,并在需要的時(shí)候重新復(fù)蘇和培養(yǎng),。目前,細(xì)胞凍存**常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,,主要采用加適量保護(hù)局的緩慢冷凍法保存細(xì)胞,。無血清非程序細(xì)胞凍存液,添加了細(xì)胞沉降穩(wěn)定劑可防止或延緩細(xì)胞在凍存過程中的沉降,,防止細(xì)胞互相擠壓,,影響細(xì)胞凍存效果。另外添加了細(xì)胞膜保護(hù)劑,。滲透性細(xì)胞膜內(nèi)保護(hù)劑,、非滲透性細(xì)胞保護(hù)劑等多種冷凍保護(hù)劑,,它們在溶液中同水分子結(jié)合,發(fā)生水合作用,,弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而減少冰晶的形成,,能**降低細(xì)胞在凍存過程中冰晶對于細(xì)胞的損傷,有效提高細(xì)胞復(fù)蘇率和活力,。同時(shí)無任何外源血清成分,,減少細(xì)胞污染機(jī)會(huì),并且無需繁瑣的程序凍存步驟,,節(jié)省了大量時(shí)間和...
再放入-80℃冰箱冷凍過夜,,次日保存到液氮罐中。目前更多使用程序降溫盒,,將細(xì)胞凍存管放于盒內(nèi),,直接置于超低溫冰箱,程序降溫盒可控制每分鐘下降1℃,。目前也有商業(yè)化的快速凍存液,,可不經(jīng)過程序降溫過程,直接置于超低溫冰箱,。注:細(xì)胞凍存后可以長期保存,,但為妥善起見,凍存半年后,,**好取出一支凍存管的細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),,觀察生長情況,然后再繼續(xù)凍存,。懸浮細(xì)胞的凍存1.直接將細(xì)胞收集到離心管,,棄上清3.以生長培養(yǎng)基(含20%胎牛血清)或100%胎牛血清重懸細(xì)胞至終濃度約107/ml,加入10%的DMSO,。4.以每管1ml分裝至凍存管中,。5.置于4oC30min,再轉(zhuǎn)入-20℃2h后,,再放入-80℃冰箱冷...
正確凍存細(xì)胞并從液氮中復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)中**重要的的技術(shù)方法之一,。防止細(xì)胞內(nèi)形成冰晶并**大程度降低細(xì)胞壓力,是凍存過程保持細(xì)胞活力的關(guān)鍵,。我們可提供各種各樣的無菌過濾,、經(jīng)應(yīng)用測試的冷凍保護(hù)劑,如DMSO和含/不含DMSO的即用型細(xì)胞凍存培養(yǎng)基,,可**大程度確保凍存和解凍過程中的細(xì)胞活力。即用型細(xì)胞凍存培養(yǎng)基便捷的細(xì)胞凍存培養(yǎng)基試劑無需滴定DMSO濃度,,且可提供不含DMSO的制劑版本,。CryoStor?細(xì)胞凍存培養(yǎng)基提供2%,、5%和10%濃度選擇,以及不含DMSO的制劑版本CryoSOFree?,。pZerve?是一種同時(shí)適合含血清培養(yǎng),,或不含二甲基亞砜(DMSO)、胎牛血清或其他動(dòng)物來源...
使細(xì)胞凍結(jié)中冰晶形成減少,,從而避免了由于冰晶形成對細(xì)胞中生命活性物質(zhì)的一系列損傷,?!?】細(xì)胞凍存時(shí)利用低溫降低細(xì)胞代謝,,使細(xì)胞處于停止生長的“休眠”狀態(tài),,等需要使用的時(shí)候再進(jìn)行復(fù)蘇操作,。細(xì)胞儲(chǔ)存在-70℃冰箱中,,可以保存一年,;若儲(chǔ)存在-196℃的液氮環(huán)境中,,理論上可以實(shí)現(xiàn)長期永存,。02細(xì)胞凍存的常見方法細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的關(guān)鍵要點(diǎn)是慢凍快融,。細(xì)胞凍存的效果主要與降溫步驟,、凍存保護(hù)液的使用,、凍存溫度,、復(fù)溫速率及用于凍存的細(xì)胞生長狀態(tài)有關(guān),?!?】降溫速率過快容易引起細(xì)胞內(nèi)冰晶損傷,,所以為防止細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰必須采用一個(gè)“慢”的降溫過程,,并使用凍存保護(hù)劑,即凍存液,。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜(...
凍存成功的兩大必要條件細(xì)胞的生長狀態(tài)按照標(biāo)準(zhǔn)凍存程序操作為什凍存細(xì)胞需要加入保護(hù)劑在不附加任何保護(hù)劑下直接凍存細(xì)胞時(shí),,細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶,,能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高,、滲透壓改變,、脫水,、PH改變,、蛋白變性等,能引起細(xì)胞死亡,。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑,,可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結(jié)條件下,,能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞,。貯存在負(fù)130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成,。實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備凍存管,、15毫升離心管,、移液管、移液槍,、qiang頭等放入無菌超凈工作臺(tái),,以紫外線照射30分鐘,。采用通風(fēng)機(jī)通風(fēng)3分鐘,。以75%酒精擦拭操作臺(tái)和雙手,。準(zhǔn)備好冰盒,。將離心機(jī)調(diào)節(jié)至800轉(zhuǎn),,3分鐘,。水浴箱調(diào)節(jié)...
提高細(xì)胞膜對水的通透性,,且對細(xì)胞無明顯毒性。慢速冷凍方法又可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,,減少胞內(nèi)形成冰結(jié)晶的機(jī)會(huì),,從而減少冰晶對細(xì)胞的損傷。對于一些原代細(xì)胞(皮膚細(xì)胞),,除滲透型保護(hù)劑外,,還會(huì)適當(dāng)添加表面型保護(hù)劑(海藻糖),,以提高細(xì)胞存活率,。所需材料?超低溫冰箱或液氮罐??20%以上血清的完全培養(yǎng)液或血清?DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(121℃蒸氣高壓消毒)?2ml**細(xì)胞凍存管?吸管,、離心管,、噴燈,、凍存管架貼壁細(xì)胞的凍存1.選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,,在凍存前*****好換液,。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉,用胰蛋白酶消化,。適時(shí)去掉胰蛋白酶,,加入等量完全培養(yǎng)基終止消化,。用吸管吸取培養(yǎng)...
操作時(shí)切勿使水浸沒凍存管口,以免造成細(xì)胞污染),;2)待細(xì)胞凍存管中凍存液完全融化后,,立即逐滴加入少量細(xì)胞完全培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞進(jìn)行混合,再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有8~10mL該細(xì)胞完全培養(yǎng)基的試管中,,輕輕混合均勻,;1000r/min離心5min,棄上清,;3)加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,,按照合適的接種密度將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)容器中,加入適量的已預(yù)熱的新鮮的細(xì)胞完全培養(yǎng)基,。4)輕輕搖晃培養(yǎng)器皿,,使細(xì)胞分布均勻,靜置于37℃,、飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。產(chǎn)品穩(wěn)定性及保存條件1)置于2~8℃避光保存,有效期為1年,;2)本產(chǎn)品請于保質(zhì)期內(nèi)使用,,超過保質(zhì)期,,必須放棄使用;3)為確保...
適用于凍存各種細(xì)胞系,、原代細(xì)胞3.無需程序降溫,,可直接放置-80℃凍存,操作簡單4.不含血清,,**減少細(xì)胞污染5.因不含血清,,批次間差異小6.無需液氮,-80℃冰箱長期凍存7.可培養(yǎng)板整板凍存,,例如雜交瘤細(xì)胞凍存時(shí)可節(jié)省篩選過程溫馨提示:1.化學(xué)組成明確,,以DMEM為母液,含有DMSO,,不含牛血清或其他蛋白成分,。2.獨(dú)特的細(xì)胞保護(hù)配方,在凍存過程中細(xì)胞可直接放入-70℃冰箱,,無需繁瑣的程序降溫操作,。3.不含牛血清或其他蛋白成分,不引入造成細(xì)胞種子污染的外源因子,,如各種牛源病毒和支原體等。4.不含牛血清或其他蛋白成分,,同樣適用于無血清培養(yǎng)的細(xì)胞凍存,。5.不含牛血清或其他蛋白成分,非常適合...
不含血清及動(dòng)物來源性蛋白,,能減少各類病毒,、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細(xì)胞安全成分明確,,批次間差異小既適用于一般細(xì)胞的凍存,,也適用于無血清培養(yǎng)細(xì)胞的凍存無需程序降溫,可直接放置-80℃冰箱長期凍存,,操作簡單可培養(yǎng)板整板凍存,,例如雜交瘤細(xì)胞的凍存,省時(shí)高效,。細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中細(xì)胞進(jìn)行保種并長期保存的常用方法,,其中細(xì)胞凍存液,作為細(xì)胞凍存時(shí)必須使用的一種溶液,,不僅更是說只是用來進(jìn)行細(xì)胞的保存,,在細(xì)胞的購買、寄贈(zèng),、交換和運(yùn)送過程中也起著關(guān)鍵作用,,因此選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要,。如果不加任何條件直接凍存細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶,,能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷,、電解質(zhì)升高、...
細(xì)胞類型細(xì)胞存活率間充質(zhì)干細(xì)胞%臍帶血細(xì)胞99%nk細(xì)胞96%表1不同細(xì)胞凍存后的細(xì)胞存活率,。細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,,減少細(xì)胞代謝,以便長期儲(chǔ)存的一種技術(shù),。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,,起到了細(xì)胞保種的作用。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用,。除此之外,,還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈(zèng),、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞,。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑...
嚴(yán)禁充裝液氧等易燃易爆及腐蝕性液體,以免產(chǎn)生猛烈燃燒,、或?qū)θ萜鳟a(chǎn)生腐蝕,。液氮是**溫液體(-196℃),在充裝時(shí),,要穿長袖工作服,、帶皮手套,以避免液氮飛濺造成***,。貯存容器不得作貯運(yùn)容器使用,。若運(yùn)輸液氮。必須使用B型貯運(yùn)容器,。因此類容器有特殊支撐結(jié)構(gòu),堅(jiān)固可靠不易損壞,。4.液氮容器在使用過程中,每天都應(yīng)隨時(shí)檢查容器的使用情況,,如發(fā)現(xiàn)容器瓶蓋上和上部有水珠或結(jié)霜情況,,說明容器質(zhì)量出現(xiàn)問題,應(yīng)立即停止使用。5.存入取出樣品要標(biāo)記,,拿取東西要輕拿輕放,。一、細(xì)胞凍存方法:凍存液**好現(xiàn)配:按1:3:6(或1:2:7)配凍存液1份DMSO3份血清和6份培養(yǎng)基(養(yǎng)細(xì)胞時(shí)用什么培養(yǎng)基凍存時(shí)就用什么...
分析純)或無色新鮮甘油步驟(一)細(xì)胞凍存1.配制含10%DMSO或甘油,、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液,;2.取對數(shù)生長期的細(xì)胞,去除舊培養(yǎng)液,,用PBS清洗,。3.去除PBS,加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長的細(xì)胞消化下來,;4.離心1000rpm,,5min;5.去除胰蛋白酶,,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),,調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的**終密度為5×106/ml~1×107/ml,;6.將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~ml,;7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,凍存時(shí)間及操作者,;8.凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/min,;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃...
常須將培養(yǎng)物進(jìn)行冷凍保存,,并在需要的時(shí)候重新復(fù)蘇和培養(yǎng)。目前,,細(xì)胞凍存**常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,,主要采用加適量保護(hù)局的緩慢冷凍法保存細(xì)胞。無血清非程序細(xì)胞凍存液,,添加了細(xì)胞沉降穩(wěn)定劑可防止或延緩細(xì)胞在凍存過程中的沉降,,防止細(xì)胞互相擠壓,影響細(xì)胞凍存效果,。另外添加了細(xì)胞膜保護(hù)劑,。滲透性細(xì)胞膜內(nèi)保護(hù)劑、非滲透性細(xì)胞保護(hù)劑等多種冷凍保護(hù)劑,,它們在溶液中同水分子結(jié)合,,發(fā)生水合作用,弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而減少冰晶的形成,能**降低細(xì)胞在凍存過程中冰晶對于細(xì)胞的損傷,,有效提高細(xì)胞復(fù)蘇率和活力,。同時(shí)無任何外源血清成分,減少細(xì)胞污染機(jī)會(huì),,并且無需繁瑣的程序凍存步驟,,節(jié)省了大量時(shí)間和...